2023年Lonza Neclefector™技術面世22周年，成功應用于原代細胞、干細胞、神經(jīng)元等難以轉(zhuǎn)染的細胞中，文獻引用量超過23,000+篇，成為基因治療、細胞治療、免疫治療研究中的一大助力。
 

隨著技術和產(chǎn)業(yè)的進一步發(fā)展，高通量核轉(zhuǎn)染的需求越來越高。Lonza推出的4D-Nucleofector™ 96孔模塊，每塊板最多可運行96個獨立程序，非常適合于中高通量的電轉(zhuǎn)實驗，具有快速、通量高、編輯效率優(yōu)秀等特點，可廣泛應用于陣列cDNA、工業(yè)生產(chǎn)元件、RNAi以及CRISPR文庫篩選中，是優(yōu)化電轉(zhuǎn)條件、藥物靶點發(fā)現(xiàn)以及疫病研究的高效工具。

應用案例分享

#1

 

文獻名稱：A platform for context-specific genetic engineering of recombinant protein production by CHO cells

應用方向：提高工業(yè)生產(chǎn)效率

發(fā)表期刊：Journal Of Biotechnology

發(fā)表時間：2020

研究內(nèi)容：在蛋白質(zhì)生產(chǎn)中，為了提高細胞系生產(chǎn)效率，往往需要針對目的蛋白（Target Protein）尋找到最合適的表達載體和培養(yǎng)條件。因此篩選表達載體過程中需要高通量方法（HT）高效的表達不同載體并測試其細胞性能（蛋白質(zhì)生產(chǎn)效率及細胞生長能力），作者利用Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品，在蛋白生產(chǎn)細胞系CHO中實現(xiàn)表達載體的高效篩選。
 

作者報道的實際測試數(shù)據(jù)：

A. Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品轉(zhuǎn)染效率（Transfection Efficiency）平均高達90%，且針對不同遺傳載體轉(zhuǎn)染效率差異較小

C. Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品在隨著加大電轉(zhuǎn)質(zhì)粒DNA量(Mass of mAB Expressing Plasmid DNA)加大對細胞活力(Growth Rate)影響較小

D. Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品在不同批次(Replicates)電轉(zhuǎn)中，批間差異小(Coefficient of Variation)

 

#2

 

文獻名稱：Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation

應用方向：針對免疫細胞進行DNA高效轉(zhuǎn)染及RNAi篩選

發(fā)表期刊：J Immunol Methods

發(fā)表時間：2010

研究內(nèi)容：針對原代免疫細胞轉(zhuǎn)染，傳統(tǒng)電轉(zhuǎn)往往效率低下并且會導致原代免疫細胞活化及成熟，為后續(xù)原代免疫細胞研究以及工業(yè)生產(chǎn)造成影響。本文中，作者利用Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品，構(gòu)建針對原代樹突狀細胞（Primary Dendritic cells）高效轉(zhuǎn)染的平臺，針對難以轉(zhuǎn)染原代樹突狀細胞實現(xiàn)70%細胞活率及超50%的轉(zhuǎn)染效率。并利用該高效轉(zhuǎn)染平臺在原代樹突狀細胞中敲低RIG-I實現(xiàn)干擾素beta的下調(diào)表達。
 

作者報道的實際測試數(shù)據(jù)：

作者使用Lonza特異性轉(zhuǎn)染緩沖液在單核樹突狀細胞（MoDCs）測試不同程序下（Nucleoporation Program，X軸）轉(zhuǎn)染GFP的效率。可見利用Lonza 96-well Shuttle™高通量系統(tǒng)篩選出FF137/FF168具有接近60%的轉(zhuǎn)染效率，并且保持90%以上的未成熟單核樹突狀細胞狀態(tài)。

作者隨后測試了FF168程序在單核樹突狀細胞中siRNA轉(zhuǎn)染效率，RIG-I蛋白表達量在核轉(zhuǎn)染后顯著下調(diào)。

在全新升級的Lonza 4D-Nucleofector™ 96孔電轉(zhuǎn)模塊中，可直接與4D-Nucleofector™ 核心模塊連接使用，用于96孔格式的中通量核轉(zhuǎn)染。每塊板最多可運行96個獨立程序，非常適合于優(yōu)化核轉(zhuǎn)染條件或作為中高通量篩選的有效工具。

應用

● 只需一塊板即可優(yōu)化任何難以轉(zhuǎn)染的細胞
● 測試建立實驗的多個條件
● 篩選cDNA, RNAi或CRISPR、TCR文庫
● 適用于細菌轉(zhuǎn)化

優(yōu)點

● 高效助力優(yōu)化、篩選

每塊板最多可運行96個獨立程序，在5分鐘內(nèi)自動處理

● 可拓展性

模塊化6×16 Nucleocuvette™板實現(xiàn)可拓展的通量

● 電轉(zhuǎn)條件可轉(zhuǎn)化性

可在不同4D-Nucleofector™模塊中，使用相同優(yōu)化好的電轉(zhuǎn)條件，實現(xiàn)不同細胞量/通量的實驗需求

● 自動化兼容

無縫集成到自動化液體處理環(huán)境中

優(yōu)化方案

4D-Nucleofector™ 96孔模塊可使用現(xiàn)有的96-well 電轉(zhuǎn)實驗方案或參考X-unit 20uL體系電轉(zhuǎn)實驗方案和導電聚合物96孔Nucleocuvette™板。

Lonza Knowledge Center中的Cell & Transfection Database中提供了特定細胞類型的優(yōu)化方案或建議。在這些優(yōu)化方案中，指出了經(jīng)過內(nèi)部測試的核轉(zhuǎn)染條件。此外，還會分享我們在處理特定細胞類型方面的經(jīng)驗和知識，有效助力您的實驗。