非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)與肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病和心血管疾病的發(fā)展密切相關，并且是許多晚期肝病的主要因素。NAFLD的全球發(fā)病率超過25%，且正在迅速增加，已成為危害人類健康的重大代謝性疾病。非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis，NASH）是NAFLD的晚期階段，在NAFLD中的發(fā)病率約為25-30%。針對NAFLD / NASH，目前尚無既定療法或FDA批準的藥物，其發(fā)病機理和潛在機制也大多未知。因此，探究并確定一種新的藥理方法用于NAFLD / NASH的有效臨床治療是至關重要的。

 

2022年11月，深圳大學蘇文研究員、華東師范大學張曉燕教授與大連醫(yī)科大學管又飛教授團隊，在Nature Communications上發(fā)表題為“Phosphorylation of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 13 at serine 33 attenuates nonalcoholic fatty liver disease in mice”的文章，揭示了17β-HSD13的蛋白磷酸化對肝細胞脂滴代謝的重要調控機制，并提出了一種新的靶向治療NAFLD方案。已有研究證明新型肝脂滴蛋白17β-HSD13（屬于17β類固醇脫氫酶），特異性表達于肝臟脂滴表面，其過表達可顯著促進脂肪肝的發(fā)生和發(fā)展，提示17β-HSD13可能在脂肪肝的干預治療中具有重要價值，但其確切功能及相關調控機制仍不清楚。本文研究中該聯合團隊發(fā)現，在肝細胞內17β-HSD13和肝臟重要水解酶——脂肪甘油三酯脂肪酶（Adipose triglyceride lipase，ATGL）及其輔因子CGI-58（Comparative gene identification 58）三者間存在動態(tài)的結合，PKA信號通路的激活可以使17β-HSD13的絲氨酸33位磷酸化，從而增加CGI-58對ATGL的激活，進而促進脂滴中甘油三酯的水解和線粒體的β-氧化，從而改善肝細胞內甘油三酯的積累。

為了研究17β-HSD13絲氨酸33位磷酸化與NAFLD的功能相關性，研究人員使用CRISPR/Cas9基因編輯技術，構建了33位丙氨酸替代的絲氨酸表達失活型(S33A)小鼠模型Hsd17B1^333A/A，并與野生型（Wild type，WT）對照組小鼠Hsd17b1^3+/+共同飼養(yǎng)5個月，Hsd17B1^333A/A小鼠出現顯著的脂肪肝表型，經H&E和油紅O染色切片掃描（由芬蘭Grundium的Ocus便攜式數字病理切片顯微成像系統進行掃描），結果顯示Hsd17B1^333A/A小鼠的肝部中央靜脈區(qū)域大量蓄積更大尺寸的肝細胞脂滴，同時IHC結果也顯示F4/80+和CD68+細胞浸潤（如圖1紅框）。結合其他相關實驗，證明17β-HSD13的絲氨酸33位磷酸化障礙促進了正常飲食小鼠的肝臟脂質積累和炎癥發(fā)生。

之后，為確定脂滴水解功能障礙是否會促進NASH的發(fā)生和發(fā)展，研究人員用高脂肪飲食（High-fat diet，HFD）喂養(yǎng)Hsd17b1^3+/+和Hsd17b1^333A/A小鼠3個月。經組織學檢查、油紅O和Masson染色分析，Hsd17b1^333A/A小鼠比Hsd17b1^3+/+小鼠表現出更嚴重的肝臟脂質積累、肝細胞氣球化和細胞外基質沉積癥狀，IHC掃描結果顯示，與WT小鼠相比，Hsd17b1^333A/A小鼠的肝臟炎癥和纖維化進程顯著加快（如圖2）。利用腺病毒載體AAV在小鼠肝內誘導表達進行協同驗證，得到類似結果（如圖3）。相關實驗證明了Ser33殘基是17β-HSD13重要的磷酸化位點，并可能參與到ATGL依賴型脂肪水解的調控中，Ser33殘基的靶向突變促進了NASH的發(fā)展。

在獲得17β-HSD13絲氨酸33位磷酸化調控NALFD的相關結論后，研究人員通過計算機輔助藥物設計技術，從FDA批準的小分子藥物庫中篩選出干預NAFLD的潛在藥物—原用于治療哮喘的瑞普特羅。繼而單獨對實驗組小鼠進行瑞普特羅給藥，油紅O、H&E和Masson染色相關研究結果顯示，相比對照組HF-Ctrl，實驗組小鼠HF-R的肝臟脂滴大小和數量均顯著減少（如圖4）。同時結合蛋白和酯類的表達分析，瑞普特羅可以通過激活PKA信號通路增加17β-HSD13絲氨酸33位的磷酸化，并抑制NALFD的發(fā)生和發(fā)展，進一步提示靶向17β-HSD13絲氨酸33位磷酸化可能是干預NAFLD的潛在藥物靶點。

綜上所述，此項研究證實了17β-HSD13是PKA新的磷酸化底物，闡明了17β-HSD13絲氨酸33位磷酸化在調控肝臟脂滴代謝中的重要作用，揭示了PKA / 17β-HSD13 / ATGL信號軸在干預脂肪肝發(fā)生和發(fā)展中的作用機制，為靶向17β-HSD13治療NAFLD及相關代謝疾病提供了重要的理論基礎。

文章中小鼠病理組織經H&E染色、油紅O染色、IHC免疫組化及Masson染色后，均使用芬蘭Grundium公司生產的OCUS便攜式數字病理切片顯微成像系統進行掃描。

 

芬蘭Grundium公司自主研發(fā)和生產了全球領先的便攜式數字病理掃描顯微成像系統--Ocus。設備具有雙層可移動載物臺，根據自動圈選的區(qū)域，結合專利的軟件算法采取螺旋路徑等非直線掃描模式，快速完成掃描。Ocus每個視野獨立自動對焦，可有效避免切片厚薄不均導致的圖像問題，且采集的圖片自動無縫拼接生成超高清圖片，不遺漏任何有價值的信息。Ocus的訪問和操作均采用瀏覽器模式，通過有線、無線或Ocus自帶熱點的鏈接，無需安裝額外的軟件或app，通過手機、Pad或電腦即可實現儀器的訪問和操控。同時機器整合了現代的通訊技術，支持多人實時共享高清圖片和遠程操控儀器，讓遠程會診、學術交流和教育更加便利。

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