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細胞培養(yǎng)過程中的多種污染類型及其拯救方法

瀏覽次數(shù):1441 發(fā)布日期:2023-9-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

1 細菌污染
1.1 細菌污染的鑒別
細菌污染是細胞培養(yǎng)當中最常出現(xiàn)的污染類型,槍頭不小心碰到瓶壁、不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶等等,不經(jīng)意的一個小動作,都可能會造成細菌污染,以致于實驗前功盡棄。 細菌污染在沒有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時,細菌污染較容易被科研工作者忽視,黑點在顯微鏡下一穿而過,小黑點因為數(shù)量少且移動迅速而不易發(fā)現(xiàn)。隨著細菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后,細菌可以從鏡下明顯識別,會呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀, 培養(yǎng)基的外觀也會發(fā)生明顯的變化,培養(yǎng)基變渾濁,有細沙狀沉淀,有時會伴有臭味。

1.2 細菌污染的解決方式
一般的細胞培養(yǎng)體系中,普遍采用雙抗或者三抗進行細菌的預(yù)防,但這兩者存在一定的局限性,比如只能預(yù)防,而不能拯救已經(jīng)細菌污染的細胞。另外,很多科研工作者從事原代的細胞分離和培養(yǎng)工作,在從動物身上取材并分離培養(yǎng)的過程中,極易造成細菌污染,如果只是加入雙抗或三抗進行沖洗組織,細菌污染無法避免,造成了珍貴動物組織的浪費。

細胞污染高效清除劑
iCell 細胞污染高效清除劑,不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細菌的功效,還可以清除支原體污染,有效消除真菌和細菌的污染,只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細菌的增殖, 本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證,完美兼具高效和廣譜清除細胞污染物的能力,對細胞生長幾乎無影響,大程度上挽救您的細胞。

2.真菌污染
2.1 真菌污染的鑒別
實驗室污染的真菌一般為三類:念珠菌、酵母菌、霉菌,細胞污染真菌通常不易察覺,只有霉菌會逐漸出現(xiàn)細絲團狀漂浮物,較容易從外觀發(fā)覺污染,其他真菌污染不像細菌污染培養(yǎng)基會渾濁,污染后培養(yǎng)液清澈透亮,與未污染的細胞從外觀上看無明顯變化。
在顯微鏡下比較容易判斷污染類型,念珠菌呈卵圓狀,在細胞周邊生長,酵母菌出芽生殖時有明顯的一大一小連體結(jié)構(gòu),霉菌可觀察到菌體菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。

2.2 真菌污染的解決方式
真菌污染由于不容易通過培養(yǎng)基的變化來判斷,一般發(fā)現(xiàn)時就是已經(jīng)爆發(fā)了,鏡下會出現(xiàn)明顯團狀或黑色絲狀污染物,細胞狀態(tài)明顯變差,很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗,但是一旦發(fā)生真菌污染,三抗對于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足,此時建議如果是還留存種子的細胞就立刻扔掉,徹底消毒滅菌細胞房和 CO2 培養(yǎng)箱,扔掉可能被污染的培養(yǎng)基,對用過的實驗器材進行滅菌。

真菌清除劑
真菌清除劑用于防止細胞培養(yǎng)過程中的真菌(包括酵母)污染,還可用于消除細胞培養(yǎng)物中的真菌(含酵母)污染。療效遠超真菌抗生素兩性霉素 B,對細胞培養(yǎng)過程中的真菌污染,如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。
真菌清除試劑經(jīng)過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證,只需 1-3 天就可以抑制真菌增長。對細胞基本無害,具有高效、特異性殺滅的特點,大程度上挽救珍貴的細胞,減少真菌污染帶來的損失。

3 黑膠蟲污染
3.1 黑膠蟲污染的鑒別
“黑膠蟲”是一種常見的細胞污染物,與細胞共生,隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長,對細胞生長不利,嚴重時導(dǎo)致細胞死亡。目前很多細胞存在被“黑膠蟲”污染的現(xiàn)象,對細胞培養(yǎng)及其后續(xù)實驗造成了極大地影響。

“黑膠蟲”污染的細胞常見的特性有以下幾點:
(1)培養(yǎng)基不渾濁,但在顯微鏡下觀察細胞時,細胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點”, 且隨著培養(yǎng)時間的延長“小黑點”逐漸增多,更換培養(yǎng)液或洗滌細胞不能將其去除;
(2)“黑膠蟲”污染的細胞,營養(yǎng)消耗快,需要頻繁更換培養(yǎng)液;
(3)“黑膠蟲”污染的細胞生長緩慢,細胞狀態(tài)差,空泡化嚴重,甚至還可能導(dǎo)致細胞形態(tài)的改變。

3.2 黑膠蟲污染的解決方式
對于黑膠蟲污染的細胞,最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對黑膠蟲進行清除,同時確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無黑膠蟲和原蟲污染的優(yōu)質(zhì)血清。

黑膠蟲清除劑
黑膠蟲清除試劑用于清除細胞培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的“黑點”,只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點”生長,一周左右即可清除“黑點”。

本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證,對細胞生長無明顯影響,具有高效、特異性殺滅的特點,可顯著清除黑膠蟲污染,大程度上挽救珍貴的細胞。

黑膠蟲清除案例

4 支原體污染
4.1 支原體污染的鑒別
支原體直徑約為 0.1-0.3 μm,具有變形能力,可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm),因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除,常用的抗生素也對支原體無效。

支原體污染是細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個世界性問題,世界各國細胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過細胞之間交叉污染,操作人員的口腔、皮膚造成污染,或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見,一般不會引起培養(yǎng)物混濁,因此細胞被支原體污染一般難以察覺。

支原體會消耗必須氨基酸,影響細胞生長速率,促進代謝物積累,改變細胞形態(tài),影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成,抑制細胞因子表達,改變被污染細胞的基因表達譜,誘導(dǎo)染色體畸變。
 

來源:浙江美森細胞科技有限公司
聯(lián)系電話:0571-86027729
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