細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的原理、步驟及注意事項(xiàng)介紹

瀏覽次數(shù)：760　發(fā)布日期：2023-8-3　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞劃痕（wound healing）法是簡捷測(cè)定細(xì)胞遷移遠(yuǎn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞的生長遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.所有要滅菌，直尺和 marker 筆在操作前紫外照射 30min。

2.先用 marker 筆在 6 孔板背后，用直尺比著，大約每隔 0.5-1cm 一道，橫穿過孔，每孔至少穿過 5 條線。

3.在空中加入約 5×105 個(gè)細(xì)胞（具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿），37°C 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.第二天用 10µl 槍頭比著直尺，與標(biāo)記線垂直的方向劃兩條平行線，槍頭要垂直，不能傾斜。

5.用 PBS 洗細(xì)胞 3 次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。

三、注意事項(xiàng)

1.在用 PBS 緩沖液沖洗時(shí)，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼璧細(xì)胞，影響實(shí)驗(yàn)拍照結(jié)果。

2.一般做劃痕實(shí)驗(yàn)，都是無血清或者低血清(<2%），否則細(xì)胞增殖就不能忽略。（也可用絲裂酶處理一小時(shí)）

3.按照 6 孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成者干交叉點(diǎn)，作為固定的檢測(cè)點(diǎn)，以解決前后觀察時(shí)位置不固定的問題。

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