< THP-1 細(xì)胞簡(jiǎn)介 >

THP-1細(xì)胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系。它來(lái)自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一。

THP-1是人外周血的單核細(xì)胞系，最初來(lái)源于急性單核細(xì)胞性白血病患者。屬于懸浮細(xì)胞，研究免疫和炎癥的理想工具。其表面抗原HLA型為：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。

營(yíng)養(yǎng)體系：細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境寧酸毋堿，開啟后的RPMI 1640培養(yǎng)基，建議一周內(nèi)使用完畢。
推薦傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次。
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO₂，溫度：37℃


01. 培養(yǎng)攻略 - 復(fù)蘇操作
/ 以T25培養(yǎng)瓶為例 /

1. 預(yù)熱水浴鍋至37℃；

2. 將細(xì)胞從液氮中取出后，放進(jìn)一次性PE手套中，立即投入水浴鍋，迅速用力搖晃管子，使其在1分鐘內(nèi)融化；

3. 酒精擦拭凍存管，進(jìn)入生物安全柜，把融化的細(xì)胞懸液緩慢滴加到預(yù)先加入5ml完全培養(yǎng)液的T25培養(yǎng)瓶中；

4. 放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。​

• ​復(fù)蘇密度建議1*10^6 cells/ml

• 48小時(shí)不要?jiǎng)蛹?xì)胞，不要晃動(dòng)培養(yǎng)皿，可以先豎直放置培養(yǎng)基

• 通常需要3-5天恢復(fù)，期間不做離心操作

• 可先提高THP-1細(xì)胞量，再去考慮解決細(xì)胞聚團(tuán)或碎片的問題

02. 培養(yǎng)攻略 - 傳代操作
半換液法傳代操作 / 以T25培養(yǎng)瓶為例 /

圖片來(lái)源   thp-1細(xì)胞半換液 - Bing images

• ​營(yíng)養(yǎng)液要給足。以T25培養(yǎng)瓶為例其營(yíng)養(yǎng)液不要少于5ml

• 不要頻繁觀察細(xì)胞，最多一天一次即可

• 不要頻繁離心換液，當(dāng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基有些變黃（橘紅色）再補(bǔ)液1-2ml即可

• 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到約2*10^6 cells/ml左右時(shí)（如果換液后培養(yǎng)基第二天便發(fā)黃，鏡下檢測(cè)無(wú)污染時(shí)）進(jìn)行傳代

• 一定不要每天離心！最多一周離心一次

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1. 預(yù)先配制好凍存液；【推薦使用VivaCell: C3522-0100，即用型凍存液】

2. 細(xì)胞約200g 3min離心后，去上清，用配好的凍存液重懸細(xì)胞；

3. 轉(zhuǎn)移入凍存管，放進(jìn)程序凍存盒。凍存盒放進(jìn)-80度冰箱過夜，再放液氮長(zhǎng)期保存。​

• THP-1細(xì)胞易受凍存影響，建議適量增加凍存細(xì)胞量(不低于1*10^6/支)

• 要在液氮中保存​

< 細(xì)胞聚團(tuán)問題 >

1. 少量正常，建議不再處理，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞量。

2. 若較多，建議排查培養(yǎng)箱、營(yíng)養(yǎng)體系的酸堿性、以及是否有新?lián)Q血清。

1. 此細(xì)胞很容易分化成為巨噬細(xì)胞。

2. 少量正常，建議傳代時(shí)候丟棄。

3. 較多，建議選用非TC處理過的培養(yǎng)瓶、排查培養(yǎng)箱、營(yíng)養(yǎng)體系的酸堿性、以及是否有新?lián)Q血清。