方法

二價(jià)抗體招募和交聯(lián)

熒光素酶免疫吸附測定（FLISA）法

生物合成法

基于重鏈縮合的抗體設(shè)計(jì)法

原理

是一種制備雙特異性抗體的常見方法，原理是將兩個(gè)單克隆抗體分別與兩種不同的抗原結(jié)合，在二者之間形成連接。

將兩個(gè)單克隆抗體通過連接器（linker）或者交聯(lián)劑（crosslinker）連接起來，形成雙特異性抗體。

利用細(xì)胞表面或質(zhì)膜上的重組蛋白將兩個(gè)單克隆抗體結(jié)合成雙特異性抗體。

通過重鏈縮合的方式將兩個(gè)單克隆抗體結(jié)合成一個(gè)分子，形成雙特異性抗體。

步驟

1. 首先制備兩個(gè)單克隆抗體，分別與目標(biāo)抗原A和B結(jié)合。對(duì)第一個(gè)單克隆抗體進(jìn)行工程改造，添加一個(gè)連接區(qū)域，使其能夠與第二個(gè)單克隆抗體連接。

2. 對(duì)第二個(gè)單克隆抗體進(jìn)行工程改造，添加一個(gè)連接區(qū)域，使其能夠與第一個(gè)單克隆抗體連接。

3. 將兩個(gè)工程改造后的單克隆抗體混合，通過二價(jià)抗體招募和交聯(lián)的方式，形成雙特異性抗體。
4. 進(jìn)行純化、鑒定等后續(xù)處理，確保制備出的雙特異性抗體質(zhì)量符合要求。

1. 首先準(zhǔn)備兩個(gè)單克隆抗體，分別與目標(biāo)抗原A和B結(jié)合。

2. 在兩個(gè)單克隆抗體中選擇合適的標(biāo)記物，如酵素、生物素等，標(biāo)記在不同的位置上。

3. 準(zhǔn)備連接器或交聯(lián)劑，將兩個(gè)標(biāo)記的單克隆抗體連接在一起。

4. 經(jīng)過純化、鑒定等后續(xù)處理，得到雙特異性抗體。

5. 雙特異性抗體可以用于診斷試劑、治療藥物等方面的應(yīng)用。

1. 選擇合適的載體和宿主細(xì)胞，構(gòu)建含有兩個(gè)單克隆抗體基因的表達(dá)載體，使其可以在細(xì)胞內(nèi)生物合成。

2. 將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，使其表達(dá)重組蛋白。

3. 因?yàn)閮蓚�(gè)單克隆抗體基因分別搭載在不同的載體上，因此需要將宿主細(xì)胞進(jìn)行交配，使得兩個(gè)不同基因的細(xì)胞融合在一起。

4. 交配后的細(xì)胞可在培養(yǎng)基中篩選出雙特異性抗體陽性細(xì)胞，并進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定和純化。

1. 首先準(zhǔn)備兩個(gè)單克隆抗體，并進(jìn)行分離其重鏈和輕鏈。

2. 在重鏈中選擇合適的區(qū)域進(jìn)行縮合，將兩個(gè)重鏈通過這個(gè)區(qū)域連接在一起，形成一個(gè)新的重鏈。

3. 將縮合后的重鏈與其原來搭配的輕鏈重新組合，得到新的雙特異性抗體分子。

4. 進(jìn)行后續(xù)的篩選、鑒定和純化等處理，得到高質(zhì)量的雙特異性抗體。

特點(diǎn)

1、結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、存儲(chǔ)條件要求較高

2、同時(shí)對(duì)于二元交聯(lián)部位的選擇也有一定的局限性，因此需要進(jìn)行進(jìn)一步的技術(shù)改進(jìn)和優(yōu)化

1、具有很高的穩(wěn)定性和生物活性

2、但在制備過程中需要對(duì)連接器和交聯(lián)劑的選擇進(jìn)行仔細(xì)的考慮，以保證制備出的雙特異性抗體的質(zhì)量和效力

3、需要注意其作用機(jī)制和適應(yīng)癥，以避免不必要的風(fēng)險(xiǎn)和副作用

1、穩(wěn)定性高、生物活性好

2、制備過程相對(duì)較為復(fù)雜，需要考慮基因的相互作用等多方面因素，以保證雙特異性抗體的質(zhì)量和效力

3、需要密切關(guān)注其作用機(jī)制和適應(yīng)癥，以避免不必要的風(fēng)險(xiǎn)和副作用

1、結(jié)構(gòu)簡單、穩(wěn)定性強(qiáng)

2、縮合的位置需要進(jìn)行仔細(xì)的選擇和優(yōu)化，以保證雙特異性抗體的質(zhì)量和效力

3、需要注意其作用機(jī)制和適應(yīng)癥，以避免不必要的風(fēng)險(xiǎn)和副作用