上新了·Octet！解鎖新技能，輕松玩轉(zhuǎn)AAV定量
 
腺相關(guān)病毒 (Adeno-associated viruses, AAV) 作為一種基因遞送工具，具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，能介導(dǎo)基因的長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)等優(yōu)點(diǎn)，是目前基因治療中的首選載體，包括天然型（AAV）和重組型（rAAV）在內(nèi)多種血清型。常用的AAV血清型有AAV1，2，5，6，7，8，9，rh10等，不同AAV血清型具有不同的衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)，由于其組織特異性（或親嗜性）不同而被廣泛應(yīng)用。



圖1. AAV載體療法占在研病毒載體基因療法的約80%



圖2. 不同血清型組織遞送特異性
 
 
AAV關(guān)鍵質(zhì)量屬性評(píng)估
之病毒顆粒數(shù)

2022年5月，國(guó)家藥監(jiān)局藥審中心發(fā)布《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》通告，病毒顆粒數(shù)是重要的質(zhì)量分析指標(biāo)之一。全新推出的Octet® AAVX腺相關(guān)病毒定量生物傳感器（貨號(hào)：18-5160），消除目前定量方法通量低、成本高、耗時(shí)長(zhǎng)的技術(shù)瓶頸，一鍵解鎖各類血清學(xué)AAV病毒衣殼定量！

AAV定量痛點(diǎn)

• 為提高AAV病毒載體的質(zhì)量和產(chǎn)品，需要在多個(gè)工藝步驟中快速定量AAV濃度，來(lái)高效地優(yōu)化生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)
• 目前的方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力費(fèi)錢，速度慢，難以優(yōu)化
• 時(shí)效性差，流程復(fù)雜。客戶需要將樣品送到分析部門(mén)或?qū)嶒?yàn)室檢測(cè)，等待2~5天才會(huì)有結(jié)果。工藝流程需要等待結(jié)果進(jìn)行下一步工作開(kāi)展或優(yōu)化調(diào)整

Octet® AAVX定量解決方案

• 基于藥典認(rèn)可的生物層干涉（BLI）技術(shù)
• Octet® R8/RH16/RH96高通量分子互作平臺(tái)
• 5分鐘即可一次性檢測(cè)8/16/96個(gè)樣品
• AAVX生物傳感器，一步法直接定量純化或粗樣品
• 可結(jié)合各種血清型：AAV1 ~ AAV9及AAVrh10
• 線性范圍寬廣：8.5×108 ~ 1×1013 vp/mL
• 可再生重復(fù)使用~20次，單個(gè)樣品檢測(cè)成本更低
• Octet® BLI Discovery v.13.0.1 軟件預(yù)設(shè)AAV定量模板

特異性高，動(dòng)態(tài)范圍廣

Octet® AAVX傳感器對(duì)AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9和AAVrh10等10種不同的AAV血清型具有良好特異性。



圖3. Octet® AAVX對(duì)10種AAV血清型的特異性結(jié)合

大多數(shù)血清型的動(dòng)態(tài)范圍在8.5x108至1.0x1013 vp/mL之間，線性范圍跨越5個(gè)數(shù)量級(jí)，無(wú)論高滴度和低滴度樣品都能得到準(zhǔn)確測(cè)量。且動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)測(cè)試的所有濃度均觀察到良好的回收率 (80–120%) 和精密度 (CV<10%)。



圖4. 使用Octet® AAVX生物傳感器對(duì)純化的AAV9衣殼定量



輕松消除基質(zhì)干擾，粗樣品表現(xiàn)優(yōu)異

AAV的整個(gè)生產(chǎn)流程會(huì)用到不同的緩沖液和培養(yǎng)基基質(zhì)，Octet® 對(duì)純化樣品和粗制樣品均表現(xiàn)出優(yōu)異的處理能力。使用樣品稀釋劑緩沖液對(duì)粗樣品進(jìn)行4倍至10倍稀釋，即可顯著減輕樣品中基質(zhì)效應(yīng)。

點(diǎn)擊了解不同血清型和
基質(zhì)類型最小稀釋系數(shù)


圖6. 使用Octet® AAVX生物傳感器對(duì)AAV9粗樣品衣殼定量（含 1% Pluronic F-68的裂解緩沖液，稀釋比例3:1；n=3）。結(jié)果顯示濃度為3.05x109–2.22x1012 vp/mL。樣品回收率在95–105%之間，并且受測(cè)濃度具有良好的精密度（CV<10%）。
 
 
與ELISA相關(guān)性

Octet® BLI搭配AAVX傳感器可以實(shí)現(xiàn)快速的檢測(cè)設(shè)置、分析和實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)顯示，從而能夠監(jiān)控和優(yōu)化每個(gè)檢測(cè)步驟。為了證實(shí)Octet® AAVX檢測(cè)法和ELISA之間的相關(guān)性，來(lái)自BridgeBio Pharma和REGENXBIO公司的研究人員在AAV生物工藝流程的不同步驟測(cè)試了樣品中的不同AAV血清型。



圖7. 使用Octet® AAVX生物傳感器和ELISA定量檢測(cè)純化樣品及粗制樣品（生物工藝中間體）中的AAV8和AAV9，數(shù)據(jù)顯示兩種方法具有良好的相關(guān)性。數(shù)據(jù)由REGENXBIO Inc.提供。



圖8. 使用Octet® AAVX生物傳感器和ELISA定量檢測(cè)AAV生產(chǎn)上游和下游不同步驟中的AAV5（包括純化樣品及粗制樣品）滴度。滴度范圍為6.73x109至9.59x1013 vp/mL，證明Octet® AAVX檢測(cè)法與ELISA之間具有良好的相關(guān)性。數(shù)據(jù)由BridgeBio Pharma, Inc.提供。


簡(jiǎn)單便捷，全面優(yōu)化
 

方法	實(shí)驗(yàn)成本	樣品制備	CV%	檢測(cè)時(shí)間
Octet® AAVX	可以再生并重復(fù)使用多達(dá)20次, <5元/樣品	無(wú)需或少量稀釋，即可直接檢測(cè)，不受基質(zhì)影響	< 10%	R8：90min/96孔板 RH16：45min/96孔板 RH96：5min/96孔板
ELISA Kit	10-20倍*	需稀釋上千倍，需要復(fù)孔，制備復(fù)雜，含包被、洗滌、孵育、二抗、終止等步驟	0-Jan-00	200~240min/96孔板
ddPCR	10-20倍*	需要樣品100倍倍比稀釋，裂解、液滴制備等步驟	< 10%	360~480min/96孔板

*與Octet® AAVX對(duì)比

總結(jié)

基于Octet® BLI 和Octet® AAVX 生物傳感器的AAV定量檢測(cè)策略可廣泛應(yīng)用于AAV 上游和下游工藝各階段，優(yōu)化傳統(tǒng)終點(diǎn)法耗時(shí)費(fèi)力的確定，提供可靠、準(zhǔn)確且便捷的AAV定量新思路。

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