細(xì)胞凋亡檢測(cè)常用的顯微鏡及形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法

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細(xì)胞凋亡檢測(cè)常用的儀器設(shè)備主要有光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等進(jìn)行觀察。

一、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡

① 未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見(jiàn)凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。

② 染色細(xì)胞：常用吉姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。

二、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來(lái)評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。常用的 DNA 特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種種染料與DNA 的結(jié)合是非嵌入式的，主要結(jié)合在 DNA 的 A-T 堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。Hoechst 是與 DNA 特異結(jié)合的活性染料，儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度，使用時(shí)用 PBS 稀釋，終濃度為10 μg/ml。DAPI 為半通透性，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度，使用終濃度一般為10 μg/ml。

結(jié)果評(píng)判：細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；Ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Ⅱb 期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體(圖1)。

三、透射電子顯微鏡觀察

結(jié)果評(píng)判：凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)(圖2)；Ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。

蘇州阿爾法生物提供的光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、生物顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

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