顯微鏡能怎樣看細菌？

顯微鏡能看細菌，是大部分人對顯微鏡的直觀認知；把手放在顯微鏡下看細菌，是大部分小朋友的直覺操作……當然，這樣可看不到細菌，那么顯微鏡應該怎么看細菌呢？今天我們就來盤盤細菌鏡檢的方式。
 

 

·常規(guī)細菌鏡檢方式：生物顯微鏡 + 革蘭氏染色等明場染色
 

生物顯微鏡ML51（左）和ML51-N（右）

 

細菌和真菌尺寸都非常小，直接觀察非常難看清，因此一般細菌觀察都需要經過染色，其中最經典的方法是革蘭氏染色。
 

革蘭氏染色是使用廣泛的一種細菌鑒別方法，革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，陰性菌呈紅色，染色后不僅可以看清細菌型態(tài)、排列和結構特征，還對抗生素選擇有指導意義。我們來給大家看看一些常見的細菌經過革蘭氏染色后的樣子。
 

這是蠟樣芽孢桿菌，呈紫色桿狀，革蘭氏陽性菌，可引起食物中毒、嘔吐。
 

這是肉毒桿菌，總體呈紫色，革蘭氏陽性菌，其次極端有陰性反應的芽孢，呈紅色，總體形狀看起來像個湯匙，會產生劇毒的肉毒毒素。
 

為了呈現(xiàn)細菌鞭毛，還有專門的鞭毛染色法，比如Leifson氏鞭毛染色法和Bailey氏鞭毛染色法，可以將鞭毛染成紅色，以便生物顯微鏡觀察。
 

抗酸染色下的桿菌（紅色）
 

革蘭氏染色主要問題是步驟比較繁瑣，如果不需要分辨革蘭氏陽性陰性，那么也可以簡單點用吉姆薩染色或者抗酸染色等方法。另外由于細菌尺寸很小，用低倍鏡檢容易漏，檢出率不理想，而如果用100X油浸物鏡高倍鏡檢，小批量還能處理，大批量的話效率堪憂。
 

·高效的細菌/真菌鏡檢：熒光顯微鏡 + 熒光染色

 

熒光顯微鏡下的細菌

 

為了提升細菌和真菌的檢出率，很多醫(yī)院目前都已經改用了明美的熒光顯微鏡做熒光鏡檢。
 

熒光觀察下的念珠菌（紅色）

 

熒光染色劑可以將細菌、真菌等目標特異性染色，經過熒光顯微鏡激發(fā)觀察，目標將會呈現(xiàn)明亮的熒光反應，而背景和其他無關目標將呈現(xiàn)為暗色到純黑，即便用低倍物鏡也能快速發(fā)現(xiàn)這些熒光反應，從而大大提升診斷的速度和準確性。

不同的熒光染料可以染色不同的細菌，可以據此快速判斷是否存在特定種類細菌，我們來給大家分享下一些常見的細菌在熒光顯微鏡下的樣子。

 

大腸桿菌，上廁所不洗手可能會感染，導致腹瀉。

 

沙門氏菌，生吃雞蛋容易感染，導致食物中毒。
 

結核桿菌，會導致結核病，屬于呼吸道七聯(lián)檢之一，其他還有六種病原體也是用熒光觀察進行判定的。
 

新生隱球菌，常見于鴿糞的致病真菌，對免疫力低的人能造成較大傷害。

 

白念珠菌，也是常見真菌，正常人也會有少量，免疫力低可能會失控增殖進而致病。

 

·普通人看細菌的方法：一臺靠譜顯微鏡 + 四種簡單方法

 

醫(yī)院用ML51-N看血涂片
 

上面都是科研和醫(yī)療層面常用的細菌觀察方式，不僅需要比較高預算的儀器設備和配套耗材，還需要比較強的專業(yè)技能，那么普通人想看細菌能怎么做呢？
 

 

首先是選擇一臺靠譜的顯微鏡。這里要糾正一個某寶、某多多等電商平臺的概念誤導，不存在什么“上萬倍放大的光學顯微鏡”。由于光學限制，一般的顯微鏡放大倍率上限在1000倍左右，也就是100X物鏡搭配10X目鏡，就到頭了，所謂萬倍放大只會讓成像偏暗且模糊，沒有意義。
 

生物顯微鏡ML11
 

常規(guī)的生物顯微鏡，如很多學校在用的ML11，標配4X/10X/40X/100X四種物鏡，可以用40X或者100X看細菌。正常渠道四個倍率全齊的新機肯定要千元以上，低于千元的畫質和做工堪憂，不建議買，關注明美看圖就好了。使用100X油浸物鏡可以看到更豐富的細菌細節(jié)，但這種高倍油浸物鏡使用比較難，需要先學習、準備好耗材再操作。
 

吉薩姆染色下的細菌
 

有靠譜儀器后，下一步就是方法了。首先是經典的明場染色，革蘭氏染色耗材比較多，步驟比較繁雜，不建議普通人從這個方法上手，建議選擇吉薩姆染色，耗材和步驟相對簡單，而且染色液也相對革蘭氏染色液更便宜。

如果不想倒騰染色，也有三種不染色的方法。
 

相襯觀察下的支原體（小黑點）
 

第一種方法是相襯觀察。相襯觀察是適合看未染色的細胞、細菌等樣品的科學方法，它能將樣品厚度差異轉化為圖像對比度，從而勾勒出樣品的型態(tài)。相襯觀察需要專門的相襯物鏡和相襯聚光鏡，倒置顯微鏡通常會配備這些，正置顯微鏡也能通過升級相襯物鏡和相襯聚光鏡實現(xiàn)，但相襯套裝通常比較貴。

 

暗場下的血紅細胞
 

第二種方法是暗場觀察。暗場觀察利用的是丁達爾效應，就是陽光斜照讓灰塵都清晰可見的那種現(xiàn)象，它可以形成黑背景、亮樣品的高對比度圖像。暗場觀察可以通過簡易暗場聚光鏡實現(xiàn)，只需在聚光鏡下安裝暗場環(huán)，然后把聚光鏡調到最高位置觀察即可，ML31等生物顯微鏡有標配的暗場環(huán)可以選購。

 

斜照明下的酵母菌

 

最后一種方法是斜照明觀察。這種方法可以讓透明樣品形成強立體感，但會形成明顯的色差（紫邊、彩色邊），同時畫面亮度會不均勻。生物顯微鏡可以0成本體驗，方法很簡單，直接把手伸到阿貝聚光鏡底部，將大部分光照遮住，留下邊緣一條縫，一邊觀察一邊調整手遮的位置和方向，直到你感覺效果最好。明美體視顯微鏡MZX100可調角度透射式底座就是利用斜照明技術，可以用于觀察透明的卵母細胞等樣品。

 

總結：用顯微鏡看細菌還真不是簡單操作，需要成像質量好的生物顯微鏡或熒光顯微鏡，方法包括革蘭氏染色等明場染色、FITC-D-Lys等熒光染色、相襯觀察、暗場觀察和斜照明觀察。對于大型醫(yī)院等機構，MF31-M熒光生物顯微鏡還是很好的選擇，快捷高效；其他機構可以考慮ML31/ML11生物顯微鏡搭配革蘭氏染色等明場染色；簡易暗場和斜照明技術要求和成本要求相對低，但效果也相對難調好，只建議普通用戶嘗試。

 

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