PCR擴(kuò)增反應(yīng)的步驟和影響因素分析
PCR(Polymerase Chain Reaction)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)。通過變性、退火、延伸等步驟,體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。
防止污染的首要原則是要設(shè)置NTC(No Template Contro|)對(duì)照，一個(gè)不含有模板DNA但含有PCR體系中所有其他成分的對(duì)照。如果不能在污染的第一時(shí)間發(fā)現(xiàn)，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)一系列的數(shù)據(jù)無法使用。準(zhǔn)備PCR體系的移液器要，千萬(wàn)不能用吸取過PCR產(chǎn)物的移液器去準(zhǔn)備PCR體系。
經(jīng)典的PCR擴(kuò)增反應(yīng)分為三步：
1、高溫變性：模板DNA經(jīng)加熱至95℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
2、低溫退火：模板DNA與引物的復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；
3、適溫延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下，以核苷酸為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
影響擴(kuò)增的因素：
1、由于各種原因，造成的PCR擴(kuò)增體系中出現(xiàn)了非目的檢測(cè)樣本本身的模板，使得PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性
2、操作錯(cuò)誤或者誤差造成的模板間交叉污染
3、PCR試劑的污染
4、PCR實(shí)驗(yàn)器材的污染
5、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的氣溶膠污染
防止污染的首要原則是要設(shè)置NTC(No Template Contro|)對(duì)照，一個(gè)不含有模板DNA但含有PCR體系中所有其他成分的對(duì)照。如果不能在污染的第一時(shí)間發(fā)現(xiàn)，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)一系列的數(shù)據(jù)無法使用。準(zhǔn)備PCR體系的移液器要，千萬(wàn)不能用吸取過PCR產(chǎn)物的移液器去準(zhǔn)備PCR體系。
- 2025年美國(guó)國(guó)際分析生化實(shí)驗(yàn)室展博覽會(huì)通知
- PMEC China實(shí)驗(yàn)室儀器與裝備展區(qū)展位火熱搶訂中
- 專訪米歐:以創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)發(fā)展,引領(lǐng)實(shí)驗(yàn)室儀器行業(yè)新未來
- 參與就有獎(jiǎng)：米歐儀器“發(fā)現(xiàn)科學(xué)之美”活動(dòng)開始啦
- 尚睿生物新一代多病原核酸檢測(cè)系統(tǒng)全國(guó)招募經(jīng)銷伙伴
- 德而特新品DPCR-96+基因擴(kuò)增儀強(qiáng)勢(shì)來襲
- 2024 BIOCHINA易貿(mào)華南展0元票通道即將截止
- CISILE 2025科學(xué)儀器與實(shí)驗(yàn)室裝備展招商全面啟動(dòng)
Copyright(C) 1998-2024 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com