可靠的長時間活細胞成像
  本文主要討論如何使用專門配置的徠卡倒置顯微鏡和臺式細胞培養(yǎng)箱輕松、可靠地研究多孔板中培養(yǎng)的平滑肌細胞（SMC）的劃痕愈合情況。血管受損后影響SMC增殖和遷移的信號轉(zhuǎn)導情況在醫(yī)學研究中有重要意義。由于SMC遍布全身，所以對其遷移情況的研究也有助于癌癥和損傷的治療。

引言
研究人員主要研究血管損傷后及動脈粥樣硬化進展過程中控制SMC的增殖和遷移的機制和細胞信號轉(zhuǎn)導情況[1,2]。這些平滑肌細胞和脈管系統(tǒng)遍及全身各部位的每一種組織內(nèi)，包括但不限于肺部、腸道和大腦。已發(fā)表的研究報告已經(jīng)證實了SMC的增殖和遷移在癌癥、眼部損傷以及動脈粥樣硬化進展過程相關[1,2]。本文主要講述如何通過徠卡倒置顯微鏡和臺式細胞培養(yǎng)箱以更加有效、可靠的方式研究多孔板中培養(yǎng)的SMC相關的劃痕愈合情況。

挑戰(zhàn)
在融合的單層細胞形成劃痕時，須隨時監(jiān)測劃痕的再生和“愈合”情況，以測定其恢復能力[3]。這就需要一個可靠的成像解決方案，該解決方案應能：1）讓細胞存活更長時間，及2）即使在多孔板內(nèi)成像，也可在成像過程中持續(xù)將焦點放在細胞上。

方法
在此研究中，多孔板內(nèi)貼壁培養(yǎng)的融合單層SMC生成“劃痕”。其是由p200移液器吸頭造成的。為研究劃痕愈合情況，緊接著使用物鏡為10x/0.32 NA（數(shù)值孔徑）的DMi8 倒置顯微鏡在相差模式下觀察細胞生長情況19個小時以上。使用了量子載物臺和臺式培養(yǎng)箱來培養(yǎng)細胞[4]。載物定位的可再現(xiàn)性功能確保在拍攝多個位置后不會丟失觀察位置。自適應焦點控制（AFC）可使物鏡“鎖定”樣本從而保持焦點，因為AFC會主動檢查樣本和物鏡的距離，隨時且隨板孔的變化保持焦點。每20分鐘拍攝一次圖像，共有114個時間點。整個過程對3個孔中的劃痕區(qū)域進行了觀察。采集圖像后，使用Leica 2D分析軟件對其進行處理，計算隨著時間推移劃痕面積發(fā)生的變化。整個實驗包括對照共檢測了4個不同孔。

結(jié)果
圖1中，單個位置顯示為19小時采集的代表性時間序列，并顯示了典型的劃痕愈合進展情況。面積隨時間的變化分析結(jié)果如圖1的下半部分所示。圖2所示為繪制的4個孔中3個孔隨時間變化的曲線，說明劃痕愈合的進展情況，即單層細胞在劃痕中的再生。
結(jié)論
本研究的結(jié)果表明，使用專門配有量子載物臺、自適應焦點控制（AFC）和臺式培養(yǎng)箱的DMi8 倒置顯微鏡，可輕松對多孔板中培養(yǎng)的SMC的劃痕愈合的過程進行研究。

了解更多：徠卡顯微

參考文獻

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