組織透明化小課堂之一:組織透明化簡介
瀏覽次數(shù):777 發(fā)布日期:2022-11-18
來源:锘海生命科學(xué)
為什么要去做組織透明化?
通常以來我們對于組織內(nèi)部結(jié)構(gòu)的觀察,以及一些組織病變的情況的一個比較,往往是通過石蠟切片和冰凍切片來進(jìn)行的,但是切片所能夠提供給我們的信息十分有限的,特別是對于一些神經(jīng)、血管等脈絡(luò)上的結(jié)構(gòu)來說,該一個弊端將更加放大。那么科學(xué)家們就在想,是不是有一種方法,能夠不通過組織切片就能夠觀察到其組織內(nèi)部的一些信號?所以組織透明化技術(shù)就應(yīng)運而生。
什么是組織透明化?
所有的組織透明化方法都有相同的目標(biāo):使大型的、固定的生物樣本透明。在這種情況下,“大”指的是厚厚的組織切片、整個類器官、整個器官甚至整個年輕的大鼠,厚度從100µm到幾厘米不等。通常,這種大小的樣品是不透明的,因此很難用顯微鏡的可見波長進(jìn)行分析。解決這個問題的一個方法是將一大塊生物組織切成薄薄的切片(大約10µm),并用顯微鏡分析這些切片。然而,對于大樣本來說,切片是勞動密集型的,并且將來自相鄰切片的信息重建成組織的三維視圖是非常費時和困難的。其他可能的方法是在較厚的組織切片上進(jìn)行共聚焦或多光子顯微鏡,盡管當(dāng)聚焦到樣本深處時成像質(zhì)量會下降,基本限制在幾百微米內(nèi)。組織透明化代表了一種不同的方法:經(jīng)過一系列的化學(xué)步驟,使一個大的樣品變得透明。
小鼠腦透明化過程
怎樣實驗組織透明化?
如果想要知道組織透明化是如何實現(xiàn)的,就有必要了解為什么大多數(shù)組織是不透明的。任何生物樣本都主要由水組成,嵌入在脂質(zhì)和蛋白質(zhì)形成的結(jié)構(gòu)中;所有這些成分在與通過組織傳播的光相互作用方面都會有所不同。這些成分之間的不同之處是它們的折射率(RI,光通過特定物質(zhì)的傳播比真空慢多少)。當(dāng)一種材料包含具有不同RIs的小尺寸組分的混合物時,光與這些非均勻組分的相互作用導(dǎo)致透明度降低(see Richardson and Lichtman, 2015, for an excellent, comprehensive review of this topic)。所有的組織透明化方法都通過相同的策略來尋求透明度:它們試圖通過去除、替換和修改樣本的一些成分來使樣本的RI均勻化。
引用文獻(xiàn)
1.& Ariel, Pablo., A beginner’s guide to tissue clearing.International Journal of Biochemistry and Cell Biology
http://dx.doi.org/10.1016/j.biocel.2016.12.009