干貨|告別繁瑣，15min輕松分離PBMC

PBMC

外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cells ，PBMC）是免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分,因此在免疫學、傳染病、惡性腫瘤、疫苗研發(fā)、移植治療、個性化醫(yī)學和毒理學等領(lǐng)域作為最基礎(chǔ)的實驗原料被廣泛使用。

從血液制備PBMC是分離特定免疫細胞亞群之前常見的一個步驟。最常用的PBMC分選方法是使用密度梯度離心液進行離心。

                                            使用普通離心管分離PBMC的標準流程

 

聽起來似乎很簡單，但小心翼翼的加樣、繁瑣的步驟將拉長實驗時間、增加錯誤率。

PBMC分選神器

耐思外周血淋巴細胞分離管
 

耐思外周血淋巴細胞分離管通過獨特的嵌套幫助你完美避坑。

⚫ 無需小心翼翼地加樣 

⚫ 無需小心地吸取細胞白膜層收集細胞 

⚫ 避免紅細胞和粒細胞再次污染   

短短的15min，通過離心、傾倒即可完成PBMC分選。
 

 

分離管特性

1.  快速分離，僅需15min即可迅速完成PBMC分選。

2.  操作簡單，無需小心而費力地將樣本加于密度梯度離心液面，收集PBMCs細胞時，只需從離心管中簡單傾倒，無需其他技術(shù)性的專業(yè)操作。

3.  一致性好，降低錯誤，減少不同用戶間的操作差異。

4.  電子束滅菌，SAL=10^-6

5.  無熱源、無核酸酶

使用方法

⚫ 前期準備

1.  將分離液的溫度平衡至室溫（RT），避光。

2.  樣品準備：抗凝全血或骨髓。根據(jù)樣本濃度狀態(tài)，可適當用生理鹽水稀釋，提高分離效果。

⚫ 分離過程

1.  將分離液用移液管從分離管嵌套的中心孔中加入：15ml的分離管需要加入約4ml分離液；50ml的分離管需要加入約13ml分離液，確保分離液覆蓋嵌套上方。

2.  將抗凝樣本沿管壁緩慢倒入或用移液管沿管壁緩慢加入到分離管中。

3.  室溫下離心10min，離心力為1200 x g。

4.  收獲PBMCs細胞，將分離管中上清倒入另一干凈離心管中，分離管中的嵌套能有效避免紅細胞和粒細胞再次污染。（注意：離心后傾倒收獲細胞前，也可先吸取采集或丟棄最上層血漿層，有助于減少細胞被血小板污染。）

5.  用PBS洗滌PBMCs細胞，在250 x g離心力下離心10min。

6.  按步驟5重復洗滌2次，用5ml PBS緩沖液重懸細胞。
 

                                   使用耐思外周血淋巴細胞分離管分離PBMC操作步驟

 

離心后液體分離情況（從上到下）：a血漿層；b富集的細胞部分（PBMCs）；c分離液；d嵌套；e沉淀（紅細胞和粒細胞）。

 

注意事項

1.  可用于人類外周血、骨髓和臍帶血樣本。不適用于血凝等異常樣本或超過48小時的樣本。

2.  15ml的分離管建議使用4-9ml樣本；50ml的分離管建議使用13-30ml樣本。

3.  對于放置24h以上的樣本，建議離心時間加長。

4.  離心后收獲細胞前，也可先吸取采集或丟棄最上層血漿層，有助于防止被血小板污染。

5.  離心后傾倒上清時不要將分離管倒置2s以上。

6.  分離管請勿重復使用。

7.  離心后，細胞可能聚集在富集層以上的分離管的管壁上。這種聚合是正常的，受樣本質(zhì)量、樣本放置時間和抗凝劑類型的影響。此聚合與分離管的使用無關(guān)。細胞可以通過使用移液管尖端輕刮聚集團的一側(cè)來清除。