瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（Transient transfection）是廣泛使用的制造方法之一，具有快速開發(fā)、靈活度高、可以生產(chǎn)多種rAAV等優(yōu)勢。其工藝開發(fā)工作集中于細(xì)胞系工程、克隆篩選、質(zhì)粒配置改進(jìn)和工藝優(yōu)化上。粘附瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（aTT）主要用于科研小規(guī)模rAAV生產(chǎn)和材料的生成，將質(zhì)粒替換為不同的目標(biāo)基因，使用單個(gè)宿主細(xì)胞系就可以生產(chǎn)多個(gè)構(gòu)建體，縮短篩選和開發(fā)時(shí)間。然而，aTT工藝的可拓展性和制造一致性仍存在不少挑戰(zhàn)。使用aTT進(jìn)行rAAV生產(chǎn)需要大量實(shí)驗(yàn)員進(jìn)行操作，勞動(dòng)密集程度高，同時(shí)可能導(dǎo)致批次間重復(fù)性差，流程難以驗(yàn)證等問題。
 

懸浮瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（sTT）能夠在攪拌罐生物反應(yīng)器中放大細(xì)胞培養(yǎng)，同時(shí)降低液體處理的要求，近年來被認(rèn)為是更理想的解決方案。有研究成功開發(fā)出高表達(dá)的細(xì)胞系并成功放大至數(shù)百升的生物反應(yīng)器中。

桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)（Baculovirus expression vector systems）具有利于放大擴(kuò)展、相較于哺乳動(dòng)物細(xì)胞平臺(tái)的體積生產(chǎn)率更高、不含動(dòng)物成分等優(yōu)點(diǎn)。但仍存在載體蛋白比率不一致，翻譯后修飾等問題，阻礙了大規(guī)模rAAV生產(chǎn)的實(shí)施。

生產(chǎn)細(xì)胞系（Producer cell lines）系統(tǒng)被認(rèn)為是成本低、穩(wěn)定性高、可拓展的生產(chǎn)平臺(tái)。其主要缺點(diǎn)是前期獲得穩(wěn)定的工程細(xì)胞系需要耗費(fèi)大量時(shí)間和資源。隨著基因治療的商業(yè)化，市場將需要更高產(chǎn)量更低成本的產(chǎn)品，應(yīng)運(yùn)而生的則是可誘導(dǎo)生產(chǎn)細(xì)胞系（iPCL）系統(tǒng)。該系統(tǒng)利用化學(xué)誘導(dǎo)啟動(dòng)子調(diào)控基因的表達(dá)，同時(shí)具有可拓展、穩(wěn)定性高、產(chǎn)量高的優(yōu)勢。誘導(dǎo)表達(dá)同時(shí)還可以減少基因表達(dá)的副作用，如細(xì)胞死亡、生產(chǎn)延遲等。利用該系統(tǒng)rAAV的生產(chǎn)可以分為細(xì)胞生長和病毒載體產(chǎn)生階段。細(xì)胞生長階段可以采用高密度細(xì)胞培養(yǎng)工藝來增加生物量。

有研究表明，使用小體積平行生物反應(yīng)器可以借助高通量與平行性的優(yōu)勢來做DOE實(shí)驗(yàn)，幫助快速篩選合適培養(yǎng)基、微載體以及工藝參數(shù)。也有團(tuán)隊(duì)通過平行生物反應(yīng)器開展灌流工藝獲得了更高的單位體積產(chǎn)量。
 

Minibox CloudReady云反應(yīng)器可根據(jù)用戶需求增加數(shù)量幾百套上千套生物反應(yīng)器，沒有數(shù)量限制，輕松實(shí)現(xiàn)高通量。采用先進(jìn)實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS）概念、項(xiàng)目制管理，實(shí)現(xiàn)分布式控制。強(qiáng)大的軟件可以將所有事件從配方執(zhí)行到歷史記錄，所有的操作記錄將自動(dòng)收集并整合到詳細(xì)的批量報(bào)告中。開展更多實(shí)驗(yàn)的同時(shí)降低實(shí)驗(yàn)成本，并大幅提高了實(shí)驗(yàn)室效率，讓工藝開發(fā)的平臺(tái)能力飛躍提升。