通過KEGG、GO富集分析，我們能夠獲取差異基因顯著富集的通路和功能，及其對表型變化的潛在作用。但無法幫助我們知曉某條通路下差異基因的總體變化趨勢，以及對應通路的狀態(tài)：到底是激活還是抑制狀態(tài)？此外，設置差異基因篩選閾值可能會漏掉一些在統(tǒng)計學意義上無顯著差異但實際有著重要生物學意義的基因。而GSEA則彌補了傳統(tǒng)富集分析的這些問題。GSEA使用所有基因而非僅差異基因進行分析，找到那些差異不顯著但基因差異表達趨勢趨于一致的功能基因集，同時還能夠判斷對應通路是處于被激活或抑制狀態(tài)。
 

GSEA分析分為三個步驟，分別為計算富集分數(shù)、估計富集分數(shù)顯著性水平和矯正多重假設驗證（如下圖所示）。

我們主要對GO、KEGG、REACTOME、WIKIPATHWAY等數(shù)據(jù)集進行GSEA分析。輸出對應基因集的富集得分曲線圖、該基因集下的核心基因在所有樣本中表達量熱圖。
 

GSEA富集分析得分曲線圖（左）和核心基因熱圖（右）

那么這個圖怎么解讀和在文章中描述呢？

接下來跟著小編學習3篇項目案例，一起增加GSEA的知識吧！
 

#項目案例1

文獻題目：Kir2.1-mediated membrane potential promotes nutrient acquisition and inflammation through regulation of nutrient transporters

發(fā)表期刊：Nature communications  IF：17.694

合作單位：浙江大學

技術手段：轉(zhuǎn)錄組+代謝組
 

結(jié)果描述：GSEA分析顯示，在Gramicidin和KCl升高的情況下，自噬反應功能顯著富集。

 

#項目案例2

文獻題目：A small molecule targeting ALOX12-ACC1 ameliorates nonalcoholic steatohepatitis in mice and macaques

發(fā)表期刊：Science Translational Medicine  IF：19.319

合作單位：武漢大學

技術手段：轉(zhuǎn)錄組+蛋白質(zhì)組+代謝組
 

結(jié)果描述：GSEA分析顯示了與不同程度敲降ACC1的肝細胞中脂肪酸合成和分泌相關的途徑和基因的激活或抑制。①ACC1（#5）的輕微敲降對參與脂肪酸合成的基因表達的影響可忽略不計。②ACC1（#4）的部分敲降有效地抑制了參與脂肪生成和脂質(zhì)分泌的基因的mRNA和蛋白質(zhì)表達。③保留完整的ACC1（#8）時這些功能則實質(zhì)性激活。

 

#項目案例3

文獻題目：Multiple omics study identifies an interspecies conserved driver for nonalcoholic steatohepatitis

發(fā)表期刊：Science Translational Medicine  IF：19.319

合作單位：武漢大學

技術手段：轉(zhuǎn)錄組+蛋白質(zhì)組+代謝組

 

結(jié)果描述：為了進一步探索脂肪毒性誘導的NASH的分子機制，作者通過基因集富集分析（GSEA）研究了四個物種的NASH和對照肝臟之間的花生四烯酸（AA）途徑的核心基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ALOX12是AA代謝途徑中的核心酶，是在所有物種中對NASH中AA途徑的激活貢獻最大的保守基因。

 

基于上述3篇案例，對GSEA分析結(jié)果的使用可總結(jié)如下：

首先看FDR（P-adjust）或者P-value是否顯著（＜0.05），表示在該功能基因集顯著富集；

其次看NES（Normalized ES）值，為正值時表示在左側(cè)分組中激活、右側(cè)分組中抑制，為負值時表示在左側(cè)分組中抑制、右側(cè)分組中激活。

GSEA分析的使用的方法可參考更多文章喲~

 

開學季，中科新生命真核生物轉(zhuǎn)錄組奉獻雙重豪禮！
一重豪禮：

T7平臺轉(zhuǎn)錄組測序，6G數(shù)據(jù)量，6個樣本起 一口價598元/樣本。
二重豪禮：

分析報告全面升級！

針對不同物種來源交付不同分析版本（醫(yī)學版、農(nóng)學版）報告，服務內(nèi)容更細致

醫(yī)學版（左）和農(nóng)學版（右）生信分析流程

 

分析呈圖美化，發(fā)表級Figure唾手可得

樣本間相關性熱圖（左）、GO富集分析氣泡圖（中）和PPI（右）

 

免費贈送GSEA高級分析，并提供多閾值篩選差異基因的分析結(jié)果，服務更貼心

GSEA富集分析（左）和以Pvalue篩選差異基因分析結(jié)果（右）