多年來(lái)，研究人員一直依賴免疫檢測(cè)技術(shù)，如蛋白質(zhì)印跡、流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) ，但免疫PCR是一種相對(duì)較新的方法。通過(guò)將酶聯(lián)免疫 ELISA 與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 相結(jié)合，免疫 PCR 提供了 較高 水平的檢測(cè)靈敏度。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
ELISA 是一種將分子吸附到固體表面（通常是微孔板孔）上的測(cè)定。從廣義上講，存在三種不同類(lèi)型的 ELISA�？乖�下降 ELISA 是一種抗原與微孔板結(jié)合的方法。相比之下， ELISA 依賴于將適當(dāng)?shù)牟东@抗體吸附到微孔板孔中，然后在用另一種抗體檢測(cè)之前從樣品中吸附抗原。第三種形式，競(jìng)爭(zhēng) ELISA，當(dāng)分析物很小且不能同時(shí)與兩種不同的抗體結(jié)合時(shí)較 有用。它通常使用抗原向下設(shè)置。ELISA 操作簡(jiǎn)單，運(yùn)行相對(duì) 簡(jiǎn)單 ，并且很容易適應(yīng)高通量篩選。

聚合酶鏈反應(yīng)
PCR 是一種用于擴(kuò)增特定 DNA 片段的技術(shù)，只需少量的起始材料即可進(jìn)行。它采用三步循環(huán)過(guò)程：1) dsDNA 的熱誘導(dǎo)變性以分離兩條互補(bǔ)鏈，2) 降低溫度以允許 PCR 引物結(jié)合，3) 使用 DNA 聚合酶產(chǎn)生目標(biāo) DNA 的互補(bǔ)拷貝順序。在傳統(tǒng) PCR 過(guò)程中，擴(kuò)增的 DNA 在凝膠上運(yùn)行并用溴化乙錠染色。實(shí)時(shí) PCR (rtPCR) ，也稱為定量 PCR (qPCR) ，而是將 PCR 產(chǎn)物的產(chǎn)生與熒光強(qiáng)度相關(guān)聯(lián)，在檢測(cè)發(fā)生時(shí)生成數(shù)據(jù)。 rtPCR 靈敏度 較 高，動(dòng)態(tài)范圍大。

免疫 PCR ：兩全其美
只要有合適的抗體試劑可用，ELISA 就可以檢測(cè)任何蛋白質(zhì)，但是它可能不夠靈敏，無(wú)法識(shí)別低豐度的蛋白質(zhì)。雖然 rtPCR 提供指數(shù)信號(hào)放大，但它不能直接用于抗原檢測(cè)，因?yàn)樗�不使用抗體。免疫 PCR 通過(guò)抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物結(jié)合了這兩種檢測(cè)形式。您可以將任何類(lèi)型的 ELISA 轉(zhuǎn)化為免疫 PCR 檢測(cè)，只需將檢測(cè)抗體替換為抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物即可。

例如，典型的ELISA 要求對(duì)目標(biāo)分析物具有特異性的抗體固定在微量滴定板的表面上。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的抗體，并在封閉步驟之后添加樣品。孵育后，洗去 表面 未結(jié)合的樣品，然后添加第二種分析物特異性抗體。如果使用直接檢測(cè)方法，該抗體將與檢測(cè)部分結(jié)合，例如酶或熒光染料。相反，間接檢測(cè)涉及另一輪洗滌步驟，然后添加綴合的抗物種二抗。

要將具有直接檢測(cè)的 ELISA 轉(zhuǎn)換為免疫 PCR 測(cè)定，只需將第二種抗原特異性抗體替換為抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物。在洗滌步驟之后，可以通過(guò) rtPCR 擴(kuò)增和檢測(cè) DNA。

將 ELISA 轉(zhuǎn)化為免疫 PCR 檢測(cè)
在開(kāi)發(fā)免疫 PCR 檢測(cè)時(shí)，調(diào)整現(xiàn)有的 ELISA 是有效的方法 。應(yīng)優(yōu)化測(cè)定的每個(gè)步驟 max 值 以特定讀數(shù)，同時(shí) min 背景信號(hào)。對(duì)于等效ELISA，可能已經(jīng)知道諸如板包被方法、洗滌緩沖液和封閉溶液的類(lèi)型、樣品孵育步驟的長(zhǎng)度和抗體的選擇等因素。

任何免疫測(cè)定的成功都取決于抗體試劑的質(zhì)量，但如果配置正確，免疫 PCR 與其他測(cè)定形式相比具有許多優(yōu)勢(shì)：
●高度靈敏—— 可以檢測(cè)皮克-飛克量的分析物
●只需要少量樣品
●與血清或尿液等復(fù)雜樣品兼容
●可重現(xiàn)
●提供多路復(fù)用選項(xiàng)
●抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物的產(chǎn)生

抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)物的生產(chǎn)成本可能較高，因?yàn)閭鹘y(tǒng)的偶聯(lián)方法需要大量的抗體，并且在純化步驟中會(huì)產(chǎn)生重大損失。然而，免疫PCR正變得越來(lái)越容易獲得，因?yàn)槟壳翱梢允褂檬袌?chǎng)上的抗體- 寡核苷酸偶聯(lián)試劑盒、酶聯(lián)免疫ELSIA 試劑盒等。

為什么切換到免疫 PCR ？
與其他免疫檢測(cè)方法相比，免疫 PCR 提供了較高的靈敏度。這使其成為檢測(cè)復(fù)雜樣品中低豐度分析物的有效工具，因?yàn)闃悠凡牧峡梢源蠓�度稀釋，從而降低背景影響并提高分析性能。該技術(shù)還能提供一致且可重復(fù)的數(shù)據(jù)。

蘇州阿爾法生物提供的免疫PCR試劑包括： ELSIA試劑盒、酶聯(lián)免疫ELSIA試劑盒、抗體、一抗、二抗、蛋白檢測(cè)試劑盒、PCR引物、PCR、QPCR相關(guān)生物試劑。