由于鱟試劑凝集系統(tǒng)中存在著G因子反應(yīng)旁路,可以被β-葡聚糖激活產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的“假陽性”,通常采用生物方法消除于擾。
USP、EP及JP在最新修訂的統(tǒng)一的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中就對(duì)鱟試劑的使用作了注釋:除內(nèi)毒素外,鱟試劑也與某些β-葡聚糖反應(yīng)。一些經(jīng)過處理而制備的鱟試劑不與β-葡聚糖反應(yīng),含有β-葡聚糖的樣品必須使用特異性鱟試劑檢查。
不同的特異性鱟試劑有不同的特點(diǎn)。無G因子鱟試劑是將普通鱟試劑中存在的G因子,以親和層析方法分離去除,即使被測樣品中存在真菌多糖(非內(nèi)毒素),也不能產(chǎn)生活化的G因子,旁路反應(yīng)被阻斷,使成為對(duì)內(nèi)毒素具有特異性。另一種特異性鱟試劑是采用一種特殊試劑,只除去抗LPS因子,而保留抗G因子,以達(dá)到即增加了對(duì)內(nèi)毒素的敏感性,又削弱了真菌多糖活性G因子的能力。
此外,1990年Tsuchiya M報(bào)道[1],由于真菌多糖與普通鱟試劑反應(yīng)形成凝膠,有一個(gè)特定濃度范圍(10-3~ 10-6 mg/ml),大于或小于這個(gè)濃度都不能成膠,故在制備普通鱟試劑的基礎(chǔ)上,加入過量的真菌多糖1mg/ml),可阻止G因子的活化,即“封閉”了旁路,達(dá)到制備特異鱟試劑的目的。復(fù)方丹參注射液、清開靈注射液﹑參麥注射液則是通過加入(1-3)-β-D葡聚糖來消除干擾的[2]。
為了避免β-葡聚糖的干擾,葉良君建議在日常工作中,應(yīng)盡量用特異性鱟試劑代替普通鱟試劑進(jìn)行含糖大輸液及其他大輸液細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查,如果使用的是普通鱟試劑,應(yīng)該在排除干擾的情況下結(jié)論;同時(shí),應(yīng)該完善藥典中葡萄糖原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),β-葡聚糖的含量控制應(yīng)納入檢測范圍,在生產(chǎn)中最好使用定點(diǎn)廠家的合格葡萄糖原料。
應(yīng)當(dāng)注意,由于不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑其特異性也不同,有時(shí)甚至相差很遠(yuǎn),因此一旦出現(xiàn)內(nèi)毒素陽性時(shí),應(yīng)在排除葡聚糖干擾后再慎下結(jié)論以免誤判。
參考文獻(xiàn):
[1] Tsuehiya M.Development of all endotoxin·speetle limuhs ameboeyte lysate test bloekingβ-glUCan-mediated pathway by earboxymethylated curdlsn and its appli- cation[J].Jpn J Baaed,1990,45(6):903-906
[2] 陳吉生,楊澤民.5種中草藥注射劑細(xì)菌內(nèi)毒紊檢查方法的研究[J].中國 藥房,2001,12(5):311-314