疫情的陰霾逐漸消散，大家將陸續(xù)重返實(shí)驗(yàn)室，重啟暫停許久的研究工作。

但實(shí)驗(yàn)室關(guān)閉或突發(fā)緊急情況造成的設(shè)備停用、設(shè)備維護(hù)缺失、再次開(kāi)啟時(shí)的調(diào)試等等問(wèn)題擺在面前，重返實(shí)驗(yàn)室時(shí)大家都不免有些緊張。
如何重整旗鼓，將實(shí)驗(yàn)設(shè)備恢復(fù)到應(yīng)有的狀態(tài)？為了幫您輕松重返實(shí)驗(yàn)室，我們有著多年實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)的工程師，為您準(zhǔn)備了重返實(shí)驗(yàn)室的四步指南。

這個(gè)問(wèn)題看上去似乎并不重要，但實(shí)際情況是，以錯(cuò)誤的方式為設(shè)備接通電源可能會(huì)對(duì)系統(tǒng)性能造成不良影響。以下為需要遵循的一些通用方法：

   • 首先啟動(dòng)PC計(jì)算機(jī)：計(jì)算機(jī)是顯微鏡系統(tǒng)的“大腦”，所以記住要首先啟動(dòng)和登錄PC計(jì)算機(jī)。
   • 打開(kāi)系統(tǒng)所有硬件：根據(jù)系統(tǒng)情況不同，可能需要特別注意打開(kāi)硬件的順序。比如：在打開(kāi)觸控屏TPC之前，必須先接通奧林巴斯系統(tǒng)控制器CBH電源。有關(guān)具體說(shuō)明，請(qǐng)參閱您的手冊(cè)。
   • 啟動(dòng)軟件：如果您在軟件啟動(dòng)過(guò)程中遇到錯(cuò)誤，我們將為您提供幫助！相關(guān)技術(shù)協(xié)助請(qǐng)與您當(dāng)?shù)氐匿N(xiāo)售代表聯(lián)系。

 

設(shè)備接通電源后，需要花一些時(shí)間適當(dāng)準(zhǔn)備、放置和調(diào)平樣品才能進(jìn)行成像。操作提示如下：

   • 準(zhǔn)備樣品

首先，選擇適當(dāng)?shù)纳w玻片。蓋玻片大多為國(guó)標(biāo) 0.17毫米厚（170微米）。配合蓋玻片使用的奧林巴斯物鏡，需要合適的厚度才能獲得良好的圖像質(zhì)量。如果蓋玻片太厚或太薄，就可能影響清晰度。

務(wù)必檢查蓋玻片的厚度，盡量使用標(biāo)準(zhǔn)載玻片。某些應(yīng)用可以使用塑料載玻片。但對(duì)于熒光成像而言，塑料具有自發(fā)熒光特性。它會(huì)在藍(lán)色和綠色通道（有時(shí)在紅色通道）中產(chǎn)生明顯的背景光。

另外，在成像之前清潔蓋玻片和載玻片也非常重要。比較好用的清潔溶液為無(wú)水乙醇。另外也可以選擇光學(xué)清潔劑，比如OLYMPUS HYPER CLEAN 6310 Optical Lens Cleaner。

在清潔光學(xué)器件時(shí)，必須要使用擦鏡紙或脫脂棉。如果使用普通面巾紙或?qū)嶒?yàn)室紙巾，會(huì)有嚴(yán)重掉屑影響成像。

   • 加載樣品
接下來(lái)，以正確的朝向在顯微鏡上放置準(zhǔn)備好的樣品。原則上蓋玻片朝向物鏡，如正置顯微鏡蓋玻片要朝上放置，倒置顯微鏡則蓋玻片朝下放置。 倒置顯微鏡需要將切片顛倒放置，常見(jiàn)的錯(cuò)誤是在放置切片時(shí)將蓋玻片朝上放置，這樣會(huì)導(dǎo)致圖像模糊。

使用倒置顯微鏡時(shí)，一定要檢查樣品是否密封良好。如果樣品密封性不佳，那么液體可能會(huì)接觸到您的物鏡或物鏡轉(zhuǎn)換器。這類液體可能會(huì)腐蝕或氧化光學(xué)涂層、光學(xué)膠或顯微鏡硬件和電子器件。

放置樣品時(shí)，請(qǐng)注意物鏡的工作距離。簡(jiǎn)單說(shuō)，工作距離就是物鏡在聚焦時(shí)需要靠近標(biāo)本的距離。一般情況我們需使用低倍物鏡找尋焦點(diǎn)，比如10X及以下物鏡。

   • 調(diào)平樣品

很多時(shí)候研究人員一般不需要擔(dān)心樣品的平整度問(wèn)題。載物臺(tái)既是固定的又是平整的，樣品托架是平整的，載玻片也是平整的。
但是對(duì)于共聚焦顯微鏡、TIRF或圖像拼接等更為敏感的應(yīng)用而言，樣品的平整度至關(guān)重要。當(dāng)樣品發(fā)生傾斜時(shí)，就可能會(huì)產(chǎn)生虛焦。例如進(jìn)行圖像拼接操作時(shí)，會(huì)產(chǎn)生明顯拼痕。
解決方法是通過(guò)某些載物臺(tái)插入配件上的校平螺釘來(lái)改善樣品的平整度。校平螺釘通常位于載物臺(tái)樣品適配器的四周。 左圖：使用經(jīng)過(guò)良好對(duì)準(zhǔn)的奧林巴斯FV3000激光掃描共聚焦顯微鏡和平坦樣品采集的圖像。

右圖：使用經(jīng)過(guò)良好對(duì)準(zhǔn)的FV3000激光掃描共聚焦顯微鏡和不平坦樣品所采集的圖像。
陰影的來(lái)源有些時(shí)候很難確定。通常情況下，樣品在樣品托架內(nèi)不平整就可能會(huì)造成陰影。
（使用20X UPlanXApo物鏡采集的圖像。洋紅色為Hoechst，綠色為MAP2（MCA-5H11）經(jīng)Alexa 488染色）。

 

 

   • 確定您的浸沒(méi)介質(zhì)

奧林巴斯物鏡常見(jiàn)的介質(zhì)類型：空氣、水、無(wú)熒光鏡油和硅油。

如果物鏡所使用的浸沒(méi)介質(zhì)選擇錯(cuò)誤，圖像質(zhì)量就會(huì)受到影響。此外，如果浸油進(jìn)入到并非為油浸設(shè)計(jì)的物鏡內(nèi)，就可能會(huì)造成設(shè)備損壞。

由于這些方面的原因，了解為您的物鏡設(shè)計(jì)的浸沒(méi)介質(zhì)非常關(guān)鍵。我們的物鏡上的顏色標(biāo)記可以讓您輕松識(shí)別相應(yīng)的浸沒(méi)介質(zhì)，確保您選擇正確。

另外，還需要考慮您的工作流程。不要在使用60X硅油物鏡成像之后，立即切換到60X水浸物鏡，硅油和水的混合不會(huì)獲得清晰的圖像。此外，在水浸之前，需要將載玻片取出并進(jìn)行清潔。

最后，務(wù)必要使用物鏡制造商為您提供的專用鏡油。
 

標(biāo)準(zhǔn)無(wú)熒光鏡油（左）和硅油（右）。
奧林巴斯有很多物鏡使用鏡油，確保使用正確的鏡油對(duì)于成像成功至關(guān)重要。
另外避免在蓋玻片將兩種浸油混合使用。

 

 

標(biāo)本準(zhǔn)備好，就可以進(jìn)行圖像采集步驟了。以下為一些圖像采集的技巧：

   • 采集圖像的有效做法
通過(guò)共聚焦或?qū)捯晥?chǎng)熒光顯微鏡采集圖像時(shí)，通常要合理的匹配照明亮度和曝光時(shí)間，這樣可以減少光漂白和光毒性。
如照明亮度過(guò)低，采用較高的檢測(cè)靈敏度會(huì)導(dǎo)致噪音；如照明亮度過(guò)高，即會(huì)產(chǎn)生光漂白和光毒性。所以，要平衡照明亮度和檢測(cè)器靈敏度參數(shù)，不同的標(biāo)本要適當(dāng)調(diào)整。
可以嘗試先使用較低的照度和較高的檢測(cè)靈敏度。這樣可以減少光漂白和光毒性。
   • 校正環(huán)
我們的某些物鏡配有校正環(huán)。在沒(méi)有經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的情況下，這些功能可能會(huì)令人困惑。一般性指導(dǎo)原則包括：
1. 無(wú)蓋玻片時(shí)，請(qǐng)使用0.0；而對(duì)于常見(jiàn)的0.17mm的蓋玻片，則請(qǐng)將矯正環(huán)轉(zhuǎn)到0.17的位置。
2. 檢查校正環(huán)上是否標(biāo)有溫度提示。如標(biāo)有溫度提示，則還要考慮室溫與所標(biāo)溫度是否匹配。請(qǐng)根據(jù)溫度設(shè)置校正環(huán)。在室溫的情況下，請(qǐng)將矯正環(huán)上白色數(shù)值對(duì)準(zhǔn)標(biāo)記線，在37°C的情況下，請(qǐng)將黃色的數(shù)值對(duì)準(zhǔn)標(biāo)記線。開(kāi)始成像時(shí)，在保持聚焦圖像亮度的同時(shí)優(yōu)化校正環(huán)。這一步需要耐心，并且要多加練習(xí)。如果無(wú)法優(yōu)化，則第一步時(shí)應(yīng)根據(jù)是否有蓋玻片將校正環(huán)轉(zhuǎn)到標(biāo)記0.0或0.17。

60X UplanXApo物鏡（右）使用標(biāo)準(zhǔn)浸油，且沒(méi)有校正環(huán)。
60X UplanApo油浸物鏡（左）使用設(shè)為0.17（＃1.5蓋玻片）的校正環(huán)。
60X UPlanSApo（中間）使用硅油浸沒(méi)，并在37°C時(shí)將校正環(huán)設(shè)為0.17（＃1.5）。
優(yōu)化校正環(huán)位置對(duì)于獲得清晰的圖像至關(guān)重要。

   • 聚光鏡對(duì)準(zhǔn)

如果您的主要應(yīng)用是熒光觀察，那么常規(guī)顯微鏡操作時(shí)，可能不會(huì)使用聚光鏡。在這種情況下，可使用聚光鏡手柄將聚光鏡移離樣品。
如果想要進(jìn)行明場(chǎng)、相襯或DIC成像，那么通常第一步要校準(zhǔn)聚光鏡的位置。在明場(chǎng)模式下，對(duì)樣品聚焦，然后關(guān)閉視場(chǎng)光圈以便可以看到視場(chǎng)光欄的像。這一過(guò)程在10X或20X倍率下最容易完成。
如果視場(chǎng)光欄的像并不清晰或沒(méi)有居中，可通過(guò)進(jìn)行科勒照明讓聚光鏡高度和中心處對(duì)齊。

聚光鏡對(duì)準(zhǔn)程序：（a）關(guān)閉視場(chǎng)光圈，（b）將視場(chǎng)光欄的像中心居中，（c）確認(rèn)精確中心，讓視場(chǎng)光欄的像內(nèi)切到視場(chǎng)邊緣，（d）然后讓視場(chǎng)光欄的像外切。

 

   • 文件大小

顯微鏡文件可能會(huì)很大。但文件的大小可以通過(guò)某些方式縮減。比如無(wú)效數(shù)據(jù)，如果用“以防萬(wàn)一”對(duì)所有位置進(jìn)行成像的辦法，實(shí)際上會(huì)讓問(wèn)題變得更復(fù)雜。
利用您所需要的視場(chǎng)、分辨率和位深，對(duì)所需要的部位進(jìn)行成像。會(huì)減少數(shù)據(jù)存儲(chǔ)和數(shù)據(jù)處理帶來(lái)的不必要的負(fù)擔(dān)。

   • 保存文件

要盡可能地馬上保存文件。計(jì)算機(jī)和硬盤(pán)在任何時(shí)候都有可能出現(xiàn)問(wèn)題，因此要將圖像保存到多個(gè)位置。
使用U盤(pán)或外部硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器時(shí)務(wù)必當(dāng)心。這類設(shè)備容易造成病毒感染，讓病毒或惡意軟件在計(jì)算機(jī)之間傳播。
成像系統(tǒng)PC計(jì)算機(jī)為了避免影響性能，很多PC沒(méi)有安裝防病毒軟件。這樣就造成計(jì)算機(jī)更容易感染病毒。成像系統(tǒng)PC出現(xiàn)病毒感染可能并不會(huì)立即體現(xiàn)，但系統(tǒng)運(yùn)行速度可能會(huì)變得緩慢，或者偶爾發(fā)生崩潰。
為了避免這類風(fēng)險(xiǎn)，請(qǐng)?jiān)谕獠看鎯?chǔ)驅(qū)動(dòng)器連接到成像系統(tǒng)PC計(jì)算機(jī)之前，先對(duì)其進(jìn)行病毒掃描。
   • 文件格式
奧林巴斯使用諸如OIR、OIF、VSI和OIB等專有文件格式。這些格式可以：
• 提供未經(jīng)壓縮的全分辨率圖像
• 保留適用于奧林巴斯成像系統(tǒng)的文件架構(gòu)
• 記錄成像參數(shù)中的元數(shù)據(jù)
在安裝適當(dāng)插件的情況下，ImageJ可以打開(kāi)這類奧林巴斯文件。我們建議盡可能以?shī)W林巴斯文件格式保存圖像，但有時(shí)也需要將文件導(dǎo)出為T(mén)IFF、JPEG 2000或其他格式。

注意：導(dǎo)出文件選項(xiàng)或?qū)С鰣D像文件類型，均會(huì)造成圖像壓縮或分辨率降低。請(qǐng)避免使用JPEG圖像，是因?yàn)檫@種格式往往會(huì)導(dǎo)致圖像被壓縮，并且細(xì)節(jié)數(shù)據(jù)會(huì)丟失。
 

 

正確關(guān)閉系統(tǒng)與正確啟動(dòng)系統(tǒng)同樣重要。以下為一些有效做法：

   • 使用后先清潔顯微鏡
成像完成后，清理、清潔系統(tǒng)不僅是基本要求，還可以防止硬件損壞。
比如，油浸物鏡使用的標(biāo)準(zhǔn)浸油，如果留在物鏡上就會(huì)變干、變硬。浸沒(méi)油在遺留幾天后很難清洗，甚至可能會(huì)流到其他顯微鏡表面。
顯微鏡載物臺(tái)或成像區(qū)域往往會(huì)存在載玻片封片劑等，這些表面都需要進(jìn)行清潔。尤其是存在可見(jiàn)液體或其他殘留物的地方。
成像后取出的樣品，最好按要求保存在37°C、室溫、4°C、-20°C或-80°C條件下。大多數(shù)載玻片或培養(yǎng)皿為了避免破裂需要在盒子里保存，且要避光。有些樣品必須及時(shí)返回細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
注意：在從一個(gè)使用者到另一使用者的切換過(guò)程中，諸如目鏡、觸摸面板控件和聚焦手柄之類通常需要接觸的表面，均為可能受到污染和造成感染。
為了減少病毒傳播，清潔這些表面非常重要！我們建議使用75%消毒酒精，清潔觸摸控件面板和目鏡。為了防止乙醇損壞橡膠，需取下目鏡上的橡膠眼罩單獨(dú)清理。

   • 關(guān)閉顯微鏡系統(tǒng)電源

正確關(guān)閉系統(tǒng)有助于確保：
1. 硬件的正確維護(hù)
2. 讓系統(tǒng)隨時(shí)可供下一用戶使用
在關(guān)閉系統(tǒng)之前，留意一下下一位使用者將會(huì)何時(shí)使用。如果馬上就要使用系統(tǒng)，可以注銷(xiāo)用戶，同時(shí)保持所有硬件繼續(xù)運(yùn)行。但如果一小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間不使用，建議將系統(tǒng)關(guān)閉。這樣做可以減少激光器、燈泡、風(fēng)扇等損耗，延長(zhǎng)組件的使用壽命。
關(guān)閉硬件之前，務(wù)必先要退出軟件。如果先關(guān)閉硬件，后關(guān)閉軟件，可能會(huì)導(dǎo)致發(fā)生錯(cuò)誤，并給下一位使用者帶來(lái)潛在問(wèn)題。

最后，如果您還有其他無(wú)法解決的問(wèn)題，請(qǐng)撥打我們的服務(wù)熱線：400-801-5530   我們會(huì)盡力為您排憂解難。