小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞的培養(yǎng)方法與注意事項
瀏覽次數(shù):830 發(fā)布日期:2022-4-8
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細胞簡介
細胞名稱:小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞
規(guī)格:1×10⁶Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息:原代細胞
培養(yǎng)條件:原代細胞取組織現(xiàn)分
產(chǎn)品特點:多種細胞現(xiàn)貨供應,代次低,狀態(tài)好,現(xiàn)貨。
儲存:接收到凍存細胞時請立即從干冰轉(zhuǎn)入液氮中保存。
運輸:凍存的細胞干冰運輸,復蘇的細胞冰袋運輸。
用途:研究
注意事項:僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準)
小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞培養(yǎng)方法
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3、按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4、將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,可參考以下方法:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入完全培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項
1、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2、收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3、由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。