2022年最新版食品安全抽檢實施細(xì)則頒布了針對于魚、蝦、蟹、鱉及海參等水產(chǎn)品可食組織中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素殘留量的測定方法——《GB 31656.11-2021 水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素殘留量的測定》。

本標(biāo)準(zhǔn)替代了《GB/T 22961-2008 河豚魚、鰻魚中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定 液相色譜-紫外檢測法》其中第二法——液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法為今年新增的檢測方法，逗點生物參照該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗，并優(yōu)化了部分參數(shù)，建立了一份具有良好回收率及穩(wěn)定性，能滿足國標(biāo)要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供參考。
 

01 樣品提取

準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的魚、蝦等水產(chǎn)類樣品2 g（精確至0.02 g）于干凈離心管中，加入6 mL Na₂EDTA-Mcllvaine溶液（pH=4±0.05）和2 mL醋酸鉛溶液，渦旋混合1 min，超聲10 min，4℃下以8000離心r/min離心5 min。

取上清液于另一干凈離心管，殘渣繼續(xù)加入6 mL Na₂EDTA-Mcllvaine溶液（pH=4±0.05）按上述方式重復(fù)提取兩次，合并全部提取液，加入10 mL正己烷，渦旋1 min，8000 r/min離心5 min，棄正己烷層，下層液取出10 mL待凈化。
 

Na₂EDTA-Mcllvaine緩沖溶液（0.1mol/L）：稱取檸檬酸12.9g、磷酸氫二鈉10.9g、乙二胺四乙酸二鈉37.2g,各自加水適量使溶解，混合，用水稀釋至1000mL,用0.1 mol/L HCl或0.1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至4.0±0.05。

醋酸鉛溶液（20.0g/L）：取醋酸鉛20.0g,加水溶解并稀釋至1000mL。
 

02  樣品凈化
 

Copure® HLB，60mg/3mL

活化：將Copure®HLB固相萃取柱依次用5 mL甲醇，5 mL水活化。

上樣：在固相萃取柱中加入上述待凈化液。

淋洗：依次用5 mL水，5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗固相萃取柱，抽干。

洗脫：加入5 mL甲醇洗脫固相萃取柱，收集全部洗脫液，45℃下氮吹至100 μL左右，加入0.1%甲酸溶液定容至1 mL,過尼龍濾膜，上機。


 

03  基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

取空白基質(zhì)同正常樣品一樣操作，收集洗脫液后，于洗脫液中分別加入適量標(biāo)液，再與其他樣品洗脫液一同氮吹，定容，使最終上機溶液的濃度分別為5 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L。

04  儀器條件
 

（1）色譜條件

儀器：UPLC-MS/MS

（Thermo Fisher TSQ Endura）

色譜柱：Hypersil GOLD C18

 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)

 流動相：A：水（0.1 %甲酸）   B：甲醇（0.1 %甲酸）

 洗脫方式：梯度洗脫，見表1

 流速：0.3 mL/min

 柱溫：30℃

 進(jìn)樣量：5 μL

表1 梯度洗脫程序

 

（2）質(zhì)譜條件

離子源：HESI          電噴霧電壓：3500 V

鞘氣壓力：40 arb      輔氣壓力：2 arb

離子傳輸管：380 ℃   輔氣溫度：350 ℃

表2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（*為定量離子）
 

05  實驗結(jié)果
 

表3  獸殘加標(biāo)回收實驗結(jié)果

圖1 添加水平為100.0 μg/kg時大頭魚中四環(huán)素類的總離子流圖