小伙伴們,我又來了~
本期給大家?guī)盹@微鏡物鏡的知識。
啥是物鏡,我想地球人都知道~
物鏡是顯微鏡的靈魂所在,物鏡是影響清晰度的最重要部件,先來了解下物鏡的重要參數(shù)。
在選擇物鏡時需要考慮以下幾個問題:
1、需要多大的放大倍數(shù)?
● 物鏡可以根據(jù)其放大倍率分為三大類。其中包括:低倍物鏡(2x、4x/5x和10x),中倍物鏡(20x、40x)和高倍物鏡(60x/63x、100x)。除了物鏡的放大倍率不同外,物鏡使用的介質也不同。例如,對于高倍鏡頭(60x和100x),經(jīng)常使用浸油來獲得高分辨率。放大倍率較低的鏡頭則采用空氣作為介質。
2、選擇哪種觀察方式?
● 顯微物鏡有很多類型,應用場景也各有不同,根據(jù)觀察方式的不同,也有不同種類。一般在物鏡的外殼上會標注物鏡的觀察方式。
● BF:明場;DF:暗場;PH:相差;PO:偏光;DIC:微分干涉;FL:熒光觀察(藍、綠、紫等);UVFL:紫外熒光觀察。
3、如何選擇一個成像效果好的物鏡?
● ①要選擇有平場矯正功能的物鏡,即標有Plan。 ②主要根據(jù)色差校正的能力來判斷成像效果:消色差物鏡(Achromatic):僅能校正紅藍光的色差。半復消色差物鏡(FL):能校正紅綠藍三色光的色差。全復消色差物鏡(Apo):能對紅綠藍三色光的色差校正兩次,同時能校正紅、藍兩色光的球差。
● 看透明切片可選擇平場消色差物鏡(Ach)?礋晒饪蛇x擇半復消色差物鏡(FL),而且有長工作距離可選,既可以看玻片也可以看培養(yǎng)皿。若需要更好的成像效果可選擇全復消色差物鏡(Apo),但Apo物鏡沒有長工作距離的,只適用于看玻片,不適合看培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶等厚的樣品。
4、對分辨率的要求是什么?
● 顯微鏡的分辨率是能分辨兩點間的最小距離,能分辨的距離越小分辨率越高。數(shù)值孔徑(NA值)與分辨率成正比,NA = n * sin α。與放大率成正比,與景深成反比。同樣的放大倍數(shù)下,NA值越高越好。在工作距離都滿足的情況下選擇NA值高的物鏡。
5、需要多長的工作距離(WD)
● 根據(jù)工作距離的不同,可以分為:①普通工作距離物鏡:工作距離小,可以觀察切片,但不能觀察培養(yǎng)皿。②長工作距離物鏡:用于倒置顯微鏡,可以滿足組織、懸浮液等材料的鏡檢。
6、所使用的玻片或培養(yǎng)板的厚度是多少?
● 在標注物鏡的光學類型的后面(∞/0)(210/0),也就是斜杠后面這個數(shù)字代表的是適用玻片厚度,(∞/0.17)(210/0.17),適用玻片厚度就是0.17毫米。如果用了不合適的蓋玻片,則會出現(xiàn)很明顯的球差(不同角度的光線沒有會聚在同一高度)從而降低成像的對比度和分辨率。NA值越高的物鏡對蓋玻片厚度越敏感,所以要選擇正規(guī)的蓋玻片。有些高NA值的物鏡以及長工作距離的物鏡有可調的蓋玻片厚度調節(jié)環(huán)可以對不同厚度的玻璃進行矯正,可用于培養(yǎng)皿的觀察,觀察時調節(jié)到相應的培養(yǎng)皿的厚度,或使用共聚焦培養(yǎng)皿,中間厚度也為0.17。