熒光定量PCR（qPCR）是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的具有特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，可以實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計算待測樣品模板的初始濃度，也被稱為實時熒光定量PCR。
定義注意點：
1. 熒光定量PCR是采用熒光染料或者是熒光探針進(jìn)行標(biāo)記跟蹤。也就是說熒光定量PCR可以采用染料法和探針法。染料法和探針法之間也有較大的區(qū)別，在選擇時需要注意。
2.熒光定量PCR可以測定樣本模板的初始濃度，也就是可以定量。這一點比普通PCR有較大優(yōu)勢，大多數(shù)時候我們需要知道的是初始濃度，而不是普通PCR的產(chǎn)物濃度。

原理：
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

檢測方法：

1.SYBRGreenⅠ法:

在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。

SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖

PCR產(chǎn)物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性)

2.TaqMan探針法:

探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。