工具:隨機器附帶的1.5 mm、2.5 mm、3 mm內(nèi)六角扳手。
1、防卷板的安裝
> 步驟1:取出玻璃防卷板,拆松防卷板組件上的黑色手擰螺母,將玻璃防卷板裝入防卷板支架,再將黑色的手擰螺母擰緊;
> 步驟2:將防卷板組件上銷釘孔與刀架左側(cè)銷釘組合,并將刀架上的螺釘孔與防卷板組件上的通孔使用螺絲連接,使用隨機器附帶的2.5 mm內(nèi)六角扳手將螺絲打緊。
2、防卷板組件的安裝調(diào)試
圖1
> 步驟1:首先檢查玻璃上邊緣是否與刀片平齊,如不平齊,調(diào)整鎖緊件(7)使玻璃上邊緣下降至刀片平齊位置,平齊后兩者不平行需進行步驟2進一步調(diào)節(jié);
> 步驟2:使用3 mm內(nèi)六角扳手擰松上圖所示的螺釘(4),使擺轉(zhuǎn)臂(6)可以活動;
> 步驟3:通過1.5 mm內(nèi)六角扳手調(diào)節(jié)頂絲(5)使擺轉(zhuǎn)臂(6)處于正確位置,即保證刀口與玻璃上邊緣平行(如上圖放大區(qū)域所示)。最后使用3 mm內(nèi)六角扳手打緊螺釘(4);
> 步驟4:調(diào)節(jié)鎖緊件(7),使得樣本可以順利通過玻璃防卷板與刀片間的空隙,至此調(diào)試完畢。
一、防卷板組件調(diào)試常見問題
1、可以見到完整的切片,但切片走向玻璃防卷板上方,不進入玻璃防卷板
問題原因:玻璃防卷板太低,需要通過調(diào)整鎖緊件(7),增加玻璃防卷板高度。
2、樣品與防卷板撞擊,切片褶皺在玻璃上
問題原因:玻璃防卷板太高,需要通過調(diào)整鎖緊件(7),降低玻璃防卷板高度。
二、使用防卷板切片的操作步驟
(以瑞沃德冷凍切片機為例)
1、設(shè)置好樣本頭溫度,將凍好的樣本安裝到樣本上。
2、向前撥動搖桿將樣本移近刀口,可根據(jù)樣本與刀口的角度差異適當調(diào)整樣本頭角度。
3、使用多功能搖桿左右撥動調(diào)整切片模式為修片模式(厚度推薦20-40 μm),使用手輪通過半刀、全刀或通過慢速進樣旋鈕+半刀旋轉(zhuǎn)手輪完成粗修。(如熟練掌握搖桿進樣節(jié)奏,也可在切片模式下輕微撥動搖桿完成修片操作)。
4、粗修完成后可左右撥動多功能搖桿調(diào)整切片模式為切片模式,使用手輪通過半刀、全刀完成細修。
5、修好后掃除廢屑后即可放下防卷板,如有需要可調(diào)整防卷板位置(可參見一、防卷板組件調(diào)試常見問題),使切出的樣本平整的進入防卷板與刀片的狹縫。
6、打開防卷板,完成貼片(如樣本發(fā)生輕微卷曲,可使用毛筆輕輕將卷曲部分輕輕攤平)。
三、使用常見問題
1、切片沾在防卷板上
問題原因:
1)防卷板組件冷凍不足,需要等待防卷板組件達到冷凍箱溫度;
2)防卷板上沾染了靜電,防卷板本身帶有一定防靜電能力,可稍等幾分鐘或使用導電材料將靜電導向箱壁;
3)防卷板臟污,擦去臟污;
4)防卷板未正確固定。
2、切片無法正常進入玻璃防卷板與刀片間的縫隙
問題原因:玻璃防卷板高度不恰當,需要調(diào)整玻璃防卷板高度,調(diào)試方法見調(diào)試常見問題。
3、防卷板組件內(nèi)切片打卷
問題原因:
1)樣本太大,防卷板組件一般支持0.5 cm-1 cm左右組織,組織太大容易打卷;
2)樣本頭設(shè)置溫度偏低,可將樣本頭溫度適當上調(diào);
3)OCT太多或樣本邊緣存在空洞,OCT包埋以剛好包住樣本為宜,樣本邊緣存在空洞時可以適當補全或重包;
4)防卷板玻璃、刀片或刀架存在臟污或防卷板玻璃、刀片存在損壞,擦拭防卷板玻璃、刀片,更換防卷板玻璃的面,更換刀片。
4、樣本上存在明顯的掛痕
問題原因:防卷板玻璃、刀片存在損壞,更換防卷板玻璃的面,更換刀片。
5、防卷板掀起時樣本原本平整的切片迅速卷曲
問題原因:防卷板溫度偏高。
四、防卷板組件推薦使用范圍
1、50 μm防卷板適宜切片厚度<4 μm時防卷,100 μm防卷板適宜切片厚度5-50 μm時防卷;
2、防卷板一般可以支持0.5-1 cm的組織防卷,如果有更大的樣本切片,建議使用毛筆輔助防卷。