實(shí)驗(yàn)室的小師妹，天天一臉崇拜的的跟著師兄學(xué)實(shí)驗(yàn)，“師兄，實(shí)時(shí)定量PCR曲線好完美啊”“師兄，Western Blot條帶好漂亮啊，都沒有雜帶”……，這樣下去，我?guī)熃愕耐�信如何立得住，師姐在�?shí)驗(yàn)室這么多年，也不是白學(xué)的，必須在小朋友面前秀秀我高大上的組織免疫熒光的片子，怎么也得讓他們崇拜一下，接下來就和大家分享下免疫熒光相關(guān)的經(jīng)驗(yàn)！

什么是免疫熒光

免疫熒光是在免疫學(xué)，生物化學(xué)和顯微技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一項(xiàng)技術(shù)，再用熒光抗體（或者）抗原作為探針檢測(cè)細(xì)胞或組織內(nèi)相應(yīng)的抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光在細(xì)胞或者組織的表達(dá)，從而確認(rèn)抗原或抗體的性質(zhì)和定位。常用的方法有直接法和間接法。
 

間接法實(shí)驗(yàn)步驟說明

冰凍切片為例：

1.切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮完全干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

2.抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中，于微波爐內(nèi)中低火5min進(jìn)行抗原修復(fù)。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

3.封閉：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

4.加一抗：甩掉封閉液，在切片上滴加配好的一抗，平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）。

5.加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的熒光二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

6.DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

7.封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

8.鏡檢拍照：切片于Echo Revolve Gen2正倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

顯微鏡在最后結(jié)果的呈現(xiàn)中發(fā)揮重要作用，我用的Echo Revolve Gen2正倒置熒光顯微鏡那是其他小伙伴羨慕的對(duì)象。

第一：高顏值，2021繆斯（MUSE）國際設(shè)計(jì)獎(jiǎng)鉑金獎(jiǎng) 。

 

第二：獨(dú)有的實(shí)時(shí)DHR數(shù)字處理技術(shù)，通過數(shù)字化圖像處理，在鏡下實(shí)時(shí)顯示高分辨圖像，清晰展現(xiàn)樣本細(xì)微結(jié)構(gòu)，顛覆傳統(tǒng)成像效果。
 

第三：Z軸高精度自動(dòng)層掃，配合實(shí)時(shí)DHR數(shù)字降噪技術(shù)，在保持高分辨率的同時(shí)，對(duì)較厚樣本進(jìn)行全景深掃描合成，實(shí)現(xiàn)全景深觀察。

下面秀一秀師姐的熒光圖

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