專題一回顧：Simoa Homebrew方法開發(fā)專題（一）| 利用Simoa平臺開發(fā)血漿p217+tau的高靈敏度檢測方法

A multicentre validation study of the diagnostic value of plasma neurofilament light

實驗方法     
腦脊液和血漿中NfL濃度的增高意味著有神經(jīng)退行性病變，本研究將NfL作為神經(jīng)退行性病變的標(biāo)志物對兩組人群進行了檢測，兩組標(biāo)本由倫敦國王學(xué)院（KCL，n = 805）和瑞典BioFINDER Study（n = 1,464）提供。根據(jù)檢測所得的NfL濃度在13種神經(jīng)退行性疾病、唐氏綜合征（DS）、抑郁癥等疾病中進行驗證。

倫敦國王學(xué)院利用Quanterix商品化試劑盒，LLOQ 為0.174pg/mL，低濃度質(zhì)控品的批內(nèi)CV為7.5%，批間CV為12.8%；高濃度質(zhì)控品的批內(nèi)CV為9.5%，批間CV為13.8%。而瑞典BioFINDER Study則采用Homebrew的方式，抗體和質(zhì)控品來源于瑞典UmanDiagnostics AB公司，制備所得的試劑盒的LLOQ 為6.7pg/mL，低濃度質(zhì)控品的批內(nèi)CV為5.5%，批間CV為8.2%；高濃度質(zhì)控品的批內(nèi)CV為9.3%，批間CV為9.4%�；�于兩組的QC數(shù)據(jù)，對Lund組中的所有樣本做了1.18倍的校正，以用于所有后續(xù)分析。

實驗結(jié)果      
血漿NfL的濃度在所有皮質(zhì)神經(jīng)退行性疾病、肌萎縮側(cè)索硬化癥（ALS）和非典型帕金森病患者中顯著升高，說明血漿NfL在臨床上可用于鑒別帕金森病患者的非典型帕金森病、唐氏綜合征患者的癡呆（DSAD）、精神疾病患者的癡呆以及認(rèn)知障礙患者的額顳葉癡呆（FTD），此外，血漿NfL在所有年齡相關(guān)的切分中表現(xiàn)最好，假陽性率低。

圖1. KCL（ King’s College London）和Lund（Swedish BioFINDER study）兩組樣本中診斷組和對照組的血漿NfL濃度。KCL（An=805）和Lund（Bn=1464）。

圖2：血漿NfL對神經(jīng)退行性疾病的診斷準(zhǔn)確性。（A）KCL組；（B）Lund組。

圖3：血漿NfL診斷神經(jīng)退行性疾病和抑郁癥的準(zhǔn)確性。（A） 對照組>65歲，（B） 對照組<65歲，（C）抑郁癥。

圖4：血漿NfL切分所有年齡段的神經(jīng)退行性疾病。（A）KCL組和（B）Lund組。

實驗結(jié)論      
本研究表明，血漿NfL濃度在多種神經(jīng)退行性疾病中升高，但在ALS、FTD和DSAD患者的樣本中濃度最高。雖然血漿NfL不能區(qū)分不同的認(rèn)知障礙，但在帕金森病患者中，血漿NfL值高表示不典型的帕金森病，而在DS患者中，血漿NfL值高則可區(qū)分有無癡呆。此外，血漿NfL可以區(qū)分中度/重度抑郁癥和神經(jīng)再生障礙。
 

SBC 自主研發(fā)的Homebrew試劑盒：

IL-6

最低檢測限：0.0160 pg/mL
定量下限：0.0510 pg/mL
定量上限：297 pg/mL
檢測動態(tài)范圍：3.8 logs

IFN-γ

最低檢測限：0.04607 pg/mL
定量下限：0.182 pg/mL
定量上限：15400 pg/mL
檢測動態(tài)范圍：3.65 logs

IL-1β

最低檢測限：0.2182 pg/mL
定量下限：0.852 pg/mL
定量上限：17400 pg/mL
檢測動態(tài)范圍：3.8 logs

持續(xù)更新中……

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