細(xì)胞因子(cytokine,CK):是由免疫細(xì)胞(如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)經(jīng)刺激而合成(一般是免疫細(xì)胞)、分泌的一類生物活性物質(zhì)分泌的蛋白質(zhì),在體內(nèi)廣泛參與免疫調(diào)節(jié)及炎癥反應(yīng)、組織修復(fù)、刺激造血系統(tǒng)、刺激細(xì)胞的增殖與凋亡等重要生理活動(dòng),在抵抗外來病原及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡中均起重要作用。
細(xì)胞因子的檢測(cè)方法一般分為生物學(xué)、分子生物學(xué)測(cè)定法及免疫學(xué)。
1、生物學(xué)測(cè)定法 其原理是根據(jù)細(xì)胞因子對(duì)特定的依賴性細(xì)胞株(即靶細(xì)胞)的促增殖作用,以增殖細(xì)胞中的DNA的合成或酶活性為指標(biāo),間接推算出細(xì)胞因子的活性單位,如對(duì)IL-1、IL-2等細(xì)胞因子活性的檢測(cè)。亦可根據(jù)某些細(xì)胞因子對(duì)特定靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng)或?qū)Σ《镜囊种谱饔眠M(jìn)行測(cè)定,如對(duì)腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測(cè)定。
2、分子生物學(xué)測(cè)定法 目前采用的技術(shù)有各種印跡法、斑點(diǎn)雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細(xì)胞因子的合成量。
3、免疫學(xué)檢測(cè)法 其基本原理是將細(xì)胞因子作為抗原進(jìn)行定量檢測(cè)。如免疫斑點(diǎn)法、ELISA法、免疫印跡法和流式細(xì)胞儀等均已用于細(xì)胞因子的檢測(cè)。
細(xì)胞因子的檢測(cè)方法對(duì)比:
1、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
原理:使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。由于酶的催化頻率很高,故可放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
優(yōu)點(diǎn):避免特異性抗體直接標(biāo)記,便宜。
缺點(diǎn):所需樣本量多、每次僅能測(cè)定一項(xiàng)細(xì)胞因子、操作步驟和測(cè)定時(shí)間過長、酶聯(lián)反應(yīng)所致的人工假象
2、流式細(xì)胞儀(CBA)
原理:利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測(cè)物,并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)類似“三明治”的顆�!郎y(cè)物復(fù)合體所散發(fā)的熒光,從而測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。
優(yōu)點(diǎn):所需樣本量少、快速(實(shí)驗(yàn)6-8h可以完成)操作簡便、靈敏度高、重復(fù)性好、高效(同一個(gè)樣品可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)因子)、安全、接近生物體的分析條件(全血檢測(cè)保留細(xì)胞及生化微環(huán)境更準(zhǔn)確反應(yīng)了體內(nèi)狀況)。
缺點(diǎn):價(jià)格略貴
3、免疫印跡法(WB)
原理:是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細(xì)胞或者組織樣本中的蛋白,經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標(biāo)蛋白與特有性一抗結(jié)合,再與辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色,分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標(biāo)蛋白在樣本中的表達(dá)情況
優(yōu)點(diǎn):高特異性、高敏感性
缺點(diǎn):細(xì)胞因子分析量較小,用WB進(jìn)行檢測(cè)有些不合適