生物學(xué)ELISA方法在黃曲霉毒素檢測中的應(yīng)用
新版 2020 藥典擴大了成熟檢測技術(shù)在藥品質(zhì)量控制中的推廣和應(yīng)用，如新增聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）法、DNA測序技術(shù)指導(dǎo)原則等，推進分子生物學(xué)檢測技術(shù)在中藥飲片、動物組織來源材料、生物制品起始材料、微生物污染溯源鑒定中的應(yīng)用。可見生物學(xué)檢測技術(shù)在越來越多的領(lǐng)域都將大有可為，未來可期。
某些中藥在種植、儲存等過程中易產(chǎn)生一些真菌毒素，如黃曲霉毒素等，對人體具有毒性，有必要加強相關(guān)真菌毒素的控制。中藥品種的原材料大多源于自然環(huán)境下生長的植物、動物或礦物，其存在有害殘留物質(zhì)或污染物質(zhì)的概率較髙。而黃曲霉毒素是由真菌黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物，廣泛存在于自然界中。
由于各類真菌毒素的發(fā)生毒性的機理不同，容易受污染的對象也有所不同。因此，應(yīng)選取容易受污染的中藥品種進行相應(yīng)毒素檢測方法的開發(fā)。糧稃類、種子類、油性成分多的品種應(yīng)注意黃曲霉毒素的檢測；處方中含有易污染的藥材以及生粉投料的中成藥品種應(yīng)注意相關(guān)真菌毒素的檢測。
2015 版藥典推薦的黃曲霉毒素檢測方法是高效液相色譜或高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC MS）聯(lián)用，2020 版藥典新增了酶聯(lián)免疫法（ELISA）的生物學(xué)檢測方法。相較于傳統(tǒng)的高效液相色譜或高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC MS）聯(lián)用方法，酶聯(lián)免疫法（ELISA）在儀器成本、檢測成本、檢測時間及樣品前處理上都具有相當大的優(yōu)勢，普通檢測人員可操作性高，且 ELISA 具有跟傳統(tǒng)方法相當?shù)臋z測靈敏度。
IKA推薦
ELISA 檢測黃曲霉毒素的實驗步驟
01
供試品粉末2g（50mL離心管）
加20ml甲醇，振蕩5min
02
渦動30s后
加san氯甲烷再次振蕩2min
03
微孔板抗體包被
加酶標抗原混勻、孵育（25°C 45min）
或底物顯色反應(yīng)（25°C 15min）
*備注：搖床/高低溫混勻器需根據(jù)反應(yīng)容器規(guī)格選配夾具
關(guān)于IKA
IKA是工業(yè)和科研領(lǐng)域世界知名的實驗室儀器設(shè)備, 分析儀器設(shè)備和加工技術(shù)制造商之一。總部位于德國施陶芬, IKA的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)于超過160個國家的客戶。公司擁有超過900多名員工, 致力于為客戶提供優(yōu)異的技術(shù), 幫助客戶獲得成功。同時，IKA還與世界知名大學(xué)和科學(xué)家進行著密切的合作, 支持其在科研道路上不斷探索。除了位于德國的總公司, IKA現(xiàn)在在美國, 中國, 馬來西亞, 日本, 印度, 巴西, 韓國, 越南, 英國和波蘭均設(shè)有獨立運營的全資子公司。
——部分文案節(jié)選自《中國藥典2020年版》
某些中藥在種植、儲存等過程中易產(chǎn)生一些真菌毒素，如黃曲霉毒素等，對人體具有毒性，有必要加強相關(guān)真菌毒素的控制。中藥品種的原材料大多源于自然環(huán)境下生長的植物、動物或礦物，其存在有害殘留物質(zhì)或污染物質(zhì)的概率較髙。而黃曲霉毒素是由真菌黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物，廣泛存在于自然界中。
由于各類真菌毒素的發(fā)生毒性的機理不同，容易受污染的對象也有所不同。因此，應(yīng)選取容易受污染的中藥品種進行相應(yīng)毒素檢測方法的開發(fā)。糧稃類、種子類、油性成分多的品種應(yīng)注意黃曲霉毒素的檢測；處方中含有易污染的藥材以及生粉投料的中成藥品種應(yīng)注意相關(guān)真菌毒素的檢測。
2015 版藥典推薦的黃曲霉毒素檢測方法是高效液相色譜或高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC MS）聯(lián)用，2020 版藥典新增了酶聯(lián)免疫法（ELISA）的生物學(xué)檢測方法。相較于傳統(tǒng)的高效液相色譜或高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC MS）聯(lián)用方法，酶聯(lián)免疫法（ELISA）在儀器成本、檢測成本、檢測時間及樣品前處理上都具有相當大的優(yōu)勢，普通檢測人員可操作性高，且 ELISA 具有跟傳統(tǒng)方法相當?shù)臋z測靈敏度。
IKA推薦
ELISA 檢測黃曲霉毒素的實驗步驟
01
供試品粉末2g（50mL離心管）
加20ml甲醇，振蕩5min
| Tube Mill control 試管研磨機 |
 |
| IKA PETTE 移液器 |
 |
| KS 260 basic / control 圓周振蕩搖床 |
 |
渦動30s后
加san氯甲烷再次振蕩2min
| VXR BASIC 小型振蕩器 |
 |
微孔板抗體包被
加酶標抗原混勻、孵育（25°C 45min）
或底物顯色反應(yīng)（25°C 15min）
| MTS 2/4 DIGITAL 酶標板震蕩器 |
 |
| Matrix Orbital Delta Plus 高低溫混勻器 |
 |
*備注：搖床/高低溫混勻器需根據(jù)反應(yīng)容器規(guī)格選配夾具
關(guān)于IKA
IKA是工業(yè)和科研領(lǐng)域世界知名的實驗室儀器設(shè)備, 分析儀器設(shè)備和加工技術(shù)制造商之一。總部位于德國施陶芬, IKA的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)于超過160個國家的客戶。公司擁有超過900多名員工, 致力于為客戶提供優(yōu)異的技術(shù), 幫助客戶獲得成功。同時，IKA還與世界知名大學(xué)和科學(xué)家進行著密切的合作, 支持其在科研道路上不斷探索。除了位于德國的總公司, IKA現(xiàn)在在美國, 中國, 馬來西亞, 日本, 印度, 巴西, 韓國, 越南, 英國和波蘭均設(shè)有獨立運營的全資子公司。
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