最近,賽業(yè)OriCell細胞交流群有很多同學(xué)在咨詢細胞污染問題。提及細胞污染,還真是讓每個培養(yǎng)細胞的新手老手唯恐避之不及呀。
害,細胞污染輕則實驗結(jié)果出不來,重則禍及他人(實驗室),前期投入的人力、物力、精力、財力和長期的堅守付諸東流。
常見的細胞污染類型
被細胞污染眷顧的科研emoer,看著一堆看不出來被什么污染的細胞,momo地流下了e滴眼淚......
細胞污染類型多樣,我們盤點了常見的細胞污染類型,如下圖:
細胞污染最直觀的方式是觀察形態(tài),當(dāng)培養(yǎng)體系出現(xiàn)細菌污染時,會出現(xiàn)培養(yǎng)基變渾濁,有異味,鏡下觀察有明顯自由行動的顆;蚰钪闋罹。真菌通常傾向于聚集生長,在培養(yǎng)體系內(nèi)形成“毛茸茸”的菌落,或絲狀菌體,但一般不出現(xiàn)培養(yǎng)基變酸等現(xiàn)象。至于支原體污染,大部分沒有任何異常情況,培養(yǎng)體系、細胞生長都正常,往往容易被實驗員忽視,但若不及時處理,容易造成交叉污染,因此建議各實驗室定期對細胞做支原體檢查。
至于黑膠蟲,目前關(guān)于它的本質(zhì)還說法不一,根據(jù)《生物化學(xué)與生物物理進展》雜志(PIBB)2020年1期發(fā)表的《細胞培養(yǎng)中“黑膠蟲”污染的檢測及防治》文章,文中指出黑膠蟲污染具有5個特征:①細胞狀態(tài)差、②低倍下呈黑色點狀、③高倍下做布朗運動、④培養(yǎng)基不渾濁、⑤與細胞數(shù)量成反比。為什么會出現(xiàn)黑膠蟲?該怎么處理?這里留個懸念,后期再做深入介紹。
了解細胞污染的來源,可以幫助減少細胞污染發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。
OriCell專家的小建議
細胞培養(yǎng)的常規(guī)操作包括換液、傳代、凍存和復(fù)蘇,只要多多注意細節(jié),提高自己的無菌意識和操作技術(shù),掌握正確處理污染的方法,其實細胞污染是完全可以避免的,也沒那么可怕。對此,OriCell專家整理了細胞污染的處理方法和預(yù)防攻略,希望大家能學(xué)以致用。
污染的處理
1. 做好與正常細胞的隔離。
2. 用大量含高濃度雙抗的培養(yǎng)基、緩沖液沖洗。
3. 聯(lián)用多種支原體清除劑。
4. 定時復(fù)檢。
細胞污染后最好的處理方式是丟棄,除非是特別有價值的細胞值得“搶救”,可以試試用大濃度的雙抗來殺死污染微生物。支原體污染后,可以選擇支原體清除劑進行處理,但要注意的是,即使是最好的清除劑也只能清除幾種或者某些類別的支原體,沒有一種清除劑能夠完全清除所有自然中浩如煙海的支原體。
污染的預(yù)防
1. 嚴(yán)格做好實驗室環(huán)境管理。
2. 培養(yǎng)根深蒂固的無菌意識。
3. 降低對抗生素的依賴。
萬事都具有兩面性,抗生素也是一把雙刃劍,一方面,使用抗生素能起到一定的預(yù)防污染作用,另一方面,它并不能保證百分百避免污染,而且要注意的是,使用不當(dāng)可能會對細胞的生長狀態(tài)有影響,甚至培養(yǎng)出“超級細菌”,切不可過分依賴。
應(yīng)對不同細胞污染有不同的處理措施,要解決細胞污染最好的辦法還是在源頭上杜絕,與其亡羊補牢,不如防患于未然。另外,盡早留種凍存,以備后用。
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