無論是初入實驗室的萌新還是久經(jīng)沙場的老將，都免不了與慢病毒打交道，可以說，慢病毒作為生物科研界的一款神器，在基礎(chǔ)研究中發(fā)揮著重要的作用。

但是，即使是如此重要的工具，很多人也用不好，歸根結(jié)底就是對它的不熟悉。

什么是慢病毒？
慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，通過長時間的潛伏它能在宿主體內(nèi)引起慢性致死性疾病。同時，它的宿主的分布范圍非常廣，包括人類和其他的哺乳動物。直接說慢病毒大家可能還是有點陌生，那么如果說艾滋病病毒（HIV）呢？沒錯，HIV也是慢病毒的一種。之所以說艾滋病非常難治療，其中一個方面就是它能通過感染細(xì)胞，將其遺傳物質(zhì)整合到宿主細(xì)胞的基因組中，與宿主細(xì)胞‘融為一體’。因此，也就賦予了慢病毒一種很重要的特征，它能將自己的遺傳物質(zhì)整合到感染細(xì)胞的基因組中，使宿主細(xì)胞長期制造病毒顆粒。

圖1. HIV-1復(fù)制的示意圖。^[2]
 

慢病毒安全么？
上面提到了慢病毒的來源，大家可能就很惶恐，心想慢病毒那么危險，實驗室為什么還要用它？但是啊，我們首先得明確一點，此慢病毒非彼慢病毒。

實驗室使用的慢病毒本質(zhì)上來說是一種載體，雖然也是病毒顆粒，但它是沒有自我復(fù)制功能的。我們實驗室使用的慢病毒是通過人為改造的，野生的慢病毒的遺傳物質(zhì)中包含了病毒顆粒制造所有蛋白的表達基因，因此當(dāng)病毒遺傳物質(zhì)整合到宿主基因組上時，宿主細(xì)胞就能源源不斷的生產(chǎn)病毒。而實驗室的慢病毒將遺傳物質(zhì)中含有外殼蛋白的所有基因都剔除了，從而保證了外源基因整合到基因組上時不會帶有表達病毒外殼所需的元件。同時，從慢病毒載體應(yīng)用于科學(xué)研究開始，至今沒有出現(xiàn)過由于慢病毒引起的重大醫(yī)療事故，可以看出它的安全性。

慢病毒是如何制作的呢？
目前慢病毒包裝系統(tǒng)已經(jīng)發(fā)展到了第三代包裝系統(tǒng)，這個包裝系統(tǒng)還有4個質(zhì)粒，也就是1個目的基因載體，3個輔助質(zhì)粒。

顧名思義，目的基因載體是用來承載我們希望表達的目的基因片段的，而3個輔助質(zhì)粒的目的是在細(xì)胞中短時間內(nèi)表達出病毒外殼所需要的的蛋白。因此我們在慢病毒包裝的過程中，只需要同時將4個質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中即可。
 

圖2. 使用慢病毒生成穩(wěn)定細(xì)胞系的示意圖。[1]

慢病毒有什么用呢？
對于這個問題，我們首先理清下慢病毒的特點。
1. 能將外源片段DNA整合到感染的細(xì)胞中
2. 整合片段具有隨機性
3. 載體容量為4.7kb

從這些特點來看，我們很容易就可以想轉(zhuǎn)基因技術(shù)。慢病毒最常見的應(yīng)用是在細(xì)胞系中穩(wěn)定過表達目的基因。換句話說，由于慢病毒能將大約4.7kb的外源DNA序列整合到基因組中，因此最適合作為轉(zhuǎn)基因的載體。

但是，值得注意的，這里的外源DNA片段并不僅僅是具有表達功能的基因，也可以是任何DNA序列。因此，我們不應(yīng)該將慢病毒的應(yīng)用局限于過表達的某個目的基因。通過慢病毒我們也可以將其他表達原件，比如啟動子、增強子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)元件等順式作用元件，整合到細(xì)胞基因組中，將有利于構(gòu)建我們實驗?zāi)康乃�需的研究模型�?br />
賽業(yè)生物提供的慢病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒包裝服務(wù)，從病毒滴度、純度、活性等方面確保病毒包裝質(zhì)量的可靠性，廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞模型的構(gòu)建、活體動物的體內(nèi)注射、基因治療等研究領(lǐng)域中，且被多篇文獻引用報道。

參考文獻：

1. Tandon, N., Thakkar, K. N., LaGory, E. L., Liu, Y. and Giaccia, A. J. (2018). Generation of Stable Expression Mammalian Cell Lines Using Lentivirus. Bio-protocol 8(21): e3073. DOI: 10.21769/BioProtoc.3073.

2. Yasutsugu Suzuki and Youichi Suzuki (July 20th 2011). Gene Regulatable Lentiviral Vector System, Viral Gene Therapy Ke Xu, IntechOpen, DOI: 10.5772/18155.