Oxoid藥敏紙片使用說明書
用途：Oxiod藥敏紙片用于半定量瓊脂擴散實驗法進行體外敏感性檢測。小結(jié)和解釋：將浸透有規(guī)定濃度的抗微生物藥物的濾紙片放置在適當(dāng)?shù)脑囼炁囵B(yǎng)基表面，以此確定能在體內(nèi)使用的合適藥物。
操作原理：將臨床分離株的純培養(yǎng)物接種到試驗培養(yǎng)基上�？股�素通過瓊脂擴散，形成濃度梯度。培養(yǎng)后，測量紙片周圍的抑菌環(huán)，并與經(jīng)測試的特定抗微生物藥物公認的抑菌環(huán)大小比較。
試劑：Oxoid藥敏紙片為6mm的濾紙片，兩面都印有字母代碼，標識抗微生物藥物和濃度。Oxoid藥敏紙片為筒裝，每筒50片。每包里面裝有5筒紙片。紙片筒采用獨立的箔密封泡罩包裝，內(nèi)有干燥劑。
注意事項：僅供體外診斷使用。遵守使用說明。整個操作過程中都要采用無菌技術(shù)并遵守針對所有微生物危害建立的預(yù)防措施的規(guī)定。按照生物危害廢棄物操作和處理指南的指導(dǎo)，必須對使用后的培養(yǎng)物、容器和其它被污染的物質(zhì)進行滅菌。不得使用超過失效期的產(chǎn)品。一旦紙筒被打開，要保證將其保存在不透明的干燥環(huán)境中，防止抗生素降解。如果紙片沒有對推薦的對照微生物產(chǎn)生預(yù)期大小的抑菌環(huán)，檢查整個操作流程。
儲存指導(dǎo)：未開封的紙筒在使用前必須儲存在-20℃到8℃。未開封的紙筒在從包裝中拿出來之前，應(yīng)放到室溫下，以便將冷凝水降到最低，因為冷凝水會降低抗微生物藥物的效力。只有對保存在適當(dāng)條件下未開封的泡罩包裝，失效日期才有效。一旦紙筒被打開，就需要與分配器裝在所提供的容器內(nèi)保存（請保證裝入了干燥劑），或者其它適合的裝入干燥劑的不透明氣密容器中，防止紙片受潮。分配器裝入保存容器中于冰箱內(nèi)儲存，在打開前放到室溫下，防止發(fā)生冷凝。一旦打開紙筒，建議紙筒儲存不得超過7天。
標本：供試微生物應(yīng)是從培養(yǎng)基中挑取的新鮮的、純的臨床分離株。如有可能，標本應(yīng)在開始抗微生物治療前，就從患者處采集。
 
操作流程：
提供的材料：Oxoid藥敏紙片。
需要但沒有提供的材料：用適當(dāng)培養(yǎng)基制成的瓊脂平板、接種用的混懸培養(yǎng)基、無菌接種環(huán)和拭子、無菌鑷子、麥氏濁度標準液、培養(yǎng)箱、改良的氣體環(huán)境、抗生素紙片分配器、質(zhì)控菌種、測量抑菌環(huán)大小的裝置和當(dāng)?shù)貥藴史椒ǖ呐凶x標準。
方法：Oxoid藥敏紙片可能會與各種標準檢測方法一起使用，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，請參見現(xiàn)行的當(dāng)?shù)刂改�，查找特定信息，如推薦的培養(yǎng)基、接種物濃度水平和培養(yǎng)條件等。
質(zhì)控程序：建議以適當(dāng)?shù)拈g隔檢測質(zhì)控菌株，可以在每次做試驗時進行，也可以根據(jù)國家標準機構(gòu)提供的抗生素敏感性檢測指南推薦的程序。如果質(zhì)控微生物對特定抗生素的檢查結(jié)果在規(guī)定的范圍以外，不得報告患者的檢查結(jié)果，并不得使用該藥敏紙片，直至確定了產(chǎn)生這種不一致結(jié)果的原因（例如培養(yǎng)基、灌裝量、接種物、培養(yǎng)條件、質(zhì)控菌株或者藥敏紙片儲存或使用不正確）。
限制：本產(chǎn)品供體外診斷使用，僅用于指示供試微生物的體內(nèi)敏感性。選擇何種抗微生物藥物進行測試和報告必須由每個臨床實驗室來決定。臨床醫(yī)生負責(zé)決定使用何種抗生素對抗供試微生物，同時應(yīng)考慮可能影響藥物體內(nèi)活性的其它因素。
臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）方法小結(jié)（其它標準有所不同）：培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂用于檢測非苛養(yǎng)微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用于檢測腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌，GC瓊脂加1%規(guī)定的生長添加劑用于檢測淋病奈瑟氏菌。嗜血桿菌檢測培養(yǎng)基用于檢測流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其它苛養(yǎng)菌或很少檢測的細菌所用的培養(yǎng)基和檢測條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細菌前不應(yīng)太潮濕。
供試微生物：采取適當(dāng)?shù)臋z測方法來核實供試微生物的推測鑒定結(jié)果。采用直接菌落法或生長法制備標準化的接種物并在制備好的15分鐘內(nèi)接種到平板上：生長法－用接種環(huán)蘸取3至5個形態(tài)上相似的菌落，并將其轉(zhuǎn)移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉湯或
類似培養(yǎng)基中。在35℃下培養(yǎng)2-6小時。用無菌鹽水或肉湯調(diào)整濁度，使?jié)岫鹊扔?.5 麥氏濁度標準（制備0.5 麥氏濁度標準液：將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中－將這一標準液置于暗處）。直接菌落法（葡萄球菌和鏈球菌的首選方法）－從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落，加入無菌鹽水或肉湯中，并制成等于0.5 麥氏濁度標準的菌懸液。
接種：將無菌拭子浸入菌懸液中，對著試管壁旋轉(zhuǎn)按壓，擠出多余的液體。沿著至少三個方向涂布平板表面。應(yīng)在接種的15分鐘內(nèi)將藥敏紙片放到平板上。
藥敏紙片：使用前要將藥敏紙片放置于室溫下。每塊平板推薦的試驗藥敏紙片數(shù)量如下：

微生物：	每塊平板推薦的藥敏紙片：
淋病奈瑟氏菌，副流感嗜血桿菌，流感嗜血桿菌和鏈球菌	140-150 mm的平板上要9張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要4張藥敏紙片
腦膜炎奈瑟氏菌	140-150 mm的平板上要5張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要2張藥敏紙片
非苛養(yǎng)菌	140-150 mm的平板上要12張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要5張藥敏紙片

在貼上藥敏紙片的15分鐘內(nèi)翻轉(zhuǎn)平板，并按照下面的規(guī)定培養(yǎng)

微生物：	培養(yǎng)要求：
流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌	5% CO2，35±2℃，16-18小時
淋病奈瑟氏菌	5% CO2，36±1℃，20-24小時
腦膜炎奈瑟氏菌	5% CO2，35±2℃，20-24小時
非苛養(yǎng)菌*	需氧，35±2℃，16-18小時
鏈球菌	5% CO2，35±2℃，20-24小時

*葡萄球菌和腸球菌需要培養(yǎng)24小時。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過35℃的條件下檢測不出來。
判讀：培養(yǎng)后，測量細菌生長完全抑制區(qū)域的直徑，精確到mm。抑菌環(huán)的邊緣應(yīng)為肉眼可以發(fā)現(xiàn)的無明顯微生物生長的區(qū)域。血平板的結(jié)果利用反射光從平板的上表面讀�。ú挥米x取溶血環(huán)的邊緣，而是細菌生長的邊緣）。所有其它培養(yǎng)基要使用黑色背景和反射光從平板的背面判讀（葡萄球菌和腸球菌除外，它們采用投射光讀�。�有微弱的生長表明有耐藥性）。如果是變形桿菌，忽略在明顯的抑菌環(huán)上生長的一層薄薄菌膜。對結(jié)果進行判讀的完整說明可依照CLSI方法，請參考現(xiàn)行的CLSI M100標準。下表只詳細說明了在CLSI標準中的那些藥物/濃度。與其它標準方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得，但沒有在本說明書中詳細列出。
*部分摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“藥敏紙片擴散法補充表”抗微生物藥物敏感性試驗性能標準�？蓮呐R床和實驗室標準化協(xié)會（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）獲得完整的標準。