認(rèn)知障礙是多發(fā)性硬化癥（MS）的一種常見癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。由于沒有既定的治療方法，尋找預(yù)防或減緩認(rèn)知能力下降的可變因素尤為重要。低水平維生素D、吸煙和抗人類皰疹病毒（EBV）核抗原1（EBNA-1）的抗體升高是目前已知的幾種MS風(fēng)險(xiǎn)因子。然而，關(guān)于這些MS風(fēng)險(xiǎn)因子能否明確預(yù)測(cè)MS患者的長(zhǎng)期認(rèn)知狀態(tài)，目前尚未進(jìn)行過較為深入的探討。

來自美國(guó)哈佛大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院的科學(xué)家們探究了維生素D、吸煙和抗EBNA-1抗體濃度是否能預(yù)測(cè)MS患者的長(zhǎng)期認(rèn)知狀態(tài)和神經(jīng)元損傷。

本研究利用Simoa（Single Molecular Array）技術(shù)對(duì)神經(jīng)軸突損傷標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)。Simoa技術(shù)是由美國(guó)Quanterix公司研發(fā)生產(chǎn)的一款超高靈敏度單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，其靈敏度為傳統(tǒng)ELISA技術(shù)的1000倍以上，檢測(cè)下限達(dá)到fg/mL，為血清/血漿中實(shí)時(shí)監(jiān)控這些標(biāo)志物提供了技術(shù)支撐，改變了腦損傷和神經(jīng)退行性疾病的診斷方式。







First published April 16, 2020

發(fā)表期刊：Neurology；IF=8.689

原文鏈接：https://n.neurology.org/content/94/18/e1950.long

研究背景
該研究團(tuán)隊(duì)之前報(bào)道過在接受了臨床BENEFIT治療（使用Betaferon/Betaseron用于新發(fā)MS的初始治療）的患者中，治療后1或2年內(nèi)維生素D水平較高的患者在后續(xù)的5年隨訪中活動(dòng)性病變和腦萎縮的發(fā)生率較低。

在本研究中，研究人員將隨訪時(shí)間延長(zhǎng)至11年，并在復(fù)發(fā)緩解性MS首次復(fù)發(fā)早期探討維生素D、吸煙和抗EBNA -1抗體是否有助于預(yù)測(cè)獨(dú)立于疾病治療的長(zhǎng)期認(rèn)知功能和神經(jīng)軸突完整性。本研究采用盲法隨訪5年，隨后觀察至8.7年，然后在第11年進(jìn)行評(píng)估，以評(píng)估早期治療的長(zhǎng)期效果。

樣本
BENEFIT（clinicaltrials.gov: NCT00185211）是一個(gè)多中心雙盲三期臨床試驗(yàn)（早期治療組和延遲治療組），這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)包括468名接受了干擾素β-1b（INFβ-1b）治療，且首次臨床發(fā)作提示MS的臨床孤立綜合征患者（CIS）。本研究是在完成11年持續(xù)治療的278名患者中進(jìn)行的（BENEFIT11:NCT01795872）。第11年進(jìn)行評(píng)估時(shí), 這278名患者中有61.5%接受了疾病緩解治療。

研究方法

一、血清中維生素D、吸煙和EBV感染相關(guān)生物標(biāo)志物的檢測(cè)
在基線期和第6、12和24個(gè)月收集血清并檢測(cè)所有生物標(biāo)志物，此外還檢測(cè)第54個(gè)月、第60個(gè)月以及第11年采集的血清中的維生素D。

1.  25-羥基維生素D （25（OH）D）是維生素D營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的首選生物標(biāo)志物，本研究對(duì)25（OH）D進(jìn)行檢測(cè)，針對(duì)前24個(gè)月收集的樣本，采用ELISA方法進(jìn)行分析；24個(gè)月之后收集的樣本采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法進(jìn)行分析。

2.  采用ELISA方法對(duì)抗EBNA-1的免疫球蛋白G （IgG）水平進(jìn)行了定量，作為過去EBV感染史的檢測(cè)；如果EBNA-1抗體呈陰性，對(duì)病毒衣殼抗原(VCA)的IgG進(jìn)行定量，來作為急性感染EBV的檢測(cè)。

3.  尼古丁代謝物可替寧是當(dāng)前或近期使用煙草的生物標(biāo)記物，與吸煙數(shù)量相關(guān)，該研究也是采用ELISA對(duì)可替寧進(jìn)行檢測(cè)。通常吸煙者體內(nèi)可替寧>25ng/mL，而非吸煙者低于10 ng/mL。

二、認(rèn)知功能與神經(jīng)元完整性研究
認(rèn)知功能通過同步聽覺系列加法測(cè)驗(yàn)（PASAT）進(jìn)行評(píng)估。PASAT是一種針對(duì)認(rèn)知功能的評(píng)估方式，主要通過測(cè)試聽覺信息處理的速度和靈活性，以及計(jì)算能力，最后通過測(cè)試分?jǐn)?shù)反映受試者的認(rèn)知功能狀態(tài)。

該研究使用Simoa法，以第1年和第11年為基線，測(cè)定了36個(gè)血清樣本的神經(jīng)絲輕鏈蛋白（NfL）濃度。血清NfL是神經(jīng)軸突損傷的生物標(biāo)志物，與腦脊液NfL密切相關(guān)。

根據(jù)性別、基線年齡、治療分配、類固醇治療、多灶癥狀、T2病變和體質(zhì)指數(shù)（BMI）調(diào)整線性和logistic回歸模型。

結(jié)論
25(OH)D較高的患者BMI較低，基線T2病變較少；抗EBNA -1滴度較高的個(gè)體和吸煙者中男性比例較高。13.8%的受試者從基線到第11年間服用維生素D補(bǔ)充劑。基線期NfL和第一年的NfL均與第11年的PASAT無關(guān)。與基線相比，第一年的NfL與第11年的NfL的相關(guān)性更強(qiáng)（表1）。

表1：278名參與者的基線特征:在前24個(gè)月內(nèi)平均25(OH)D的五分位數(shù)，基線EBNA-1 IgG抗體滴度的四分位數(shù)，以及基線可替寧水平

一、長(zhǎng)期認(rèn)知功能研究
1. CIS發(fā)生后的前幾年里，體內(nèi)25(OH)D較高的患者在第11年P(guān)ASAT測(cè)試中的得分低于中位數(shù)的可能性較小。（如圖）

Figure. 根據(jù)癥狀出現(xiàn)后24個(gè)月和60個(gè)月內(nèi)平均25(OH)D五分位數(shù)，臨床分離綜合征11年后PASAT(中位得分56分或以下)認(rèn)知能力較差的比值比(OR)和95%置信區(qū)間(CIs)

2. 在線性模型中，吸煙者往往具有長(zhǎng)期認(rèn)知能力較差的表現(xiàn)，對(duì)應(yīng)于臨床意義上的PASAT的5.4點(diǎn)，且在重度吸煙者的患者中最為明顯（表2）。

表2：CIS后11年P(guān)ASAT評(píng)估血清可替寧水平(吸煙的生物標(biāo)志物)和長(zhǎng)期認(rèn)知能力

二、長(zhǎng)期神經(jīng)軸突完整性研究
長(zhǎng)期神經(jīng)完整性與長(zhǎng)期認(rèn)知表現(xiàn)存在聯(lián)系。前24個(gè)月或60個(gè)月25(OH)D平均水平升高50 nmol/L與血清NfL降低20%相關(guān)，表明第11年神經(jīng)軸突損傷更少（表4）。此外，在發(fā)病后24個(gè)月內(nèi)吸煙與第11年時(shí)NfL升高20%有關(guān)（表4）。

表4：CIS患者血清NfL濃度測(cè)定血清25-羥基維生素D (25(OH)D)、可替寧和EBNA-1抗體水平和長(zhǎng)期神經(jīng)軸突損傷

小結(jié)
根據(jù)PASAT的評(píng)估，臨床MS發(fā)病后較高的25(OH)D水平預(yù)示著更好的認(rèn)知功能，而在病程11年后較低的NfL水平則預(yù)示著充足的維生素D水平可能有助于MS患者的長(zhǎng)期神經(jīng)保護(hù)。與不吸煙者相比，吸煙者在PASAT測(cè)試中的長(zhǎng)期認(rèn)知得分更低，而在NfL中得分更高。相比之下，EBV血清學(xué)標(biāo)記物不能預(yù)測(cè)認(rèn)知表現(xiàn)或NfL濃度。

本研究的結(jié)論更一步證實(shí)了NfL可能是臨床MS研究的一個(gè)有效的生物標(biāo)志物。

綜上所述，臨床MS發(fā)病后較低的維生素D水平和吸煙預(yù)示了MS患者長(zhǎng)期認(rèn)知功能和神經(jīng)元完整性較差；提示臨床多發(fā)性硬化癥發(fā)病后糾正維生素D不足和戒煙可保護(hù)長(zhǎng)期認(rèn)知功能和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的完整性。

因此可以在CIS和MS患者中常規(guī)考慮補(bǔ)充維生素D，特別是那些維生素D水平不足的患者，鼓勵(lì)和幫助病人戒煙仍然至關(guān)重要。

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