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實驗動物麻醉操作講解

瀏覽次數(shù):8325 發(fā)布日期:2020-3-20  來源:萊艾特科技
麻醉(Anesthesia):從愛護動物的觀點出發(fā),為減輕其實驗痛苦,利用物理或化學的方法,使動物的全身或局部暫時失去痛覺或痛覺遲鈍,減少動物的掙扎和保持安靜,以保證實驗操作的進行。

麻醉的分類:根據(jù)麻醉范圍主要分為全身麻醉和局部麻醉,全身麻醉又分為吸入麻醉和非吸入麻醉。 

1. 全身麻醉:

吸入麻醉:又稱為氣麻,將揮發(fā)性或氣體麻醉劑,由動物呼吸道吸入體內(nèi)而產(chǎn)生麻醉效果;大小鼠實驗中常用乙醚異氟烷、七氟烷等麻醉劑;
非吸入麻醉:即注射麻醉,包括肌肉、腹腔、靜脈注射,大小鼠實驗中常用阿佛丁、戊巴比妥鈉、水合氯醛和氯胺酮等麻醉劑。

2. 局部麻醉:

指通過麻醉藥阻斷機體某一部分的感覺神經(jīng)傳導功能,而運動神經(jīng)傳導保持完好或同時有程度不等的被阻滯狀態(tài)。
下面就介紹幾種常見的麻醉劑的使用方法:

一、吸入式麻醉  

起效快,恢復也快,且麻醉的深度和維持時間易控制,被認為是嚙齒類動物最可靠的麻醉方式。我們下面主要介紹2種常見的麻醉劑——異氟烷和乙醚。

1. 乙醚(Diethyl ether)

特點:為高度易揮發(fā)性液體,被吸收后會廣泛抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng),操作簡單,見效快;
操作方式:將被乙醚浸濕的消毒脫脂棉球或紗布放入燒杯(常用1000ml)內(nèi),將實驗動物放入,用塑料薄膜封口,觀察,會發(fā)現(xiàn)動物先開始興奮,繼而出現(xiàn)抑制,自行倒下。若實驗時間過長,可將動物固定在實驗臺上,將含有乙醚的棉球靠近其鼻部,保持吸入狀態(tài);

缺點:但其對呼吸系統(tǒng)有刺激性,可增加呼吸道分泌物;若麻醉過深,可導致動物死亡;由于其會對實驗動物有害,且可能造成的操作人員危險等原因,目前使用相對較少[1]。

適用實驗:由于起效和維持時間短,僅5-10min,主要用于短時間的淺麻實驗,如大鼠眼眶取血等簡單實驗。
  
2. 異氟烷 (Isoflurane) 

特點:異氟烷為無色的澄明液體,易揮發(fā),具有輕微氣味;誘導和復蘇均較快,加上不會影響動物的生理指標,在動物實驗中的應用日趨廣泛;

操作方式:一般使用時會配專用的吸入麻醉機,混合純氧進行麻醉,通過氧氣氣流使異氟烷揮發(fā),誘導麻醉一般使用2~3%的濃度,維持使用1.5~2%。一般在麻醉機連接一個麻醉罐子,如果單獨維持麻醉操作就使用面罩比較合適。一般小鼠的麻醉時間為2~3min,大鼠的麻醉時間為4~5min;
 

萊艾特科技異氟烷使用裝置

適用實驗:研究表明,異氟烷麻醉能維持動物的心率、血氧分壓、血液pH等生理功能處于穩(wěn)定狀態(tài)[2],適合情況復雜且持續(xù)時間較長的動物實驗[3],包括連續(xù)監(jiān)測動物參數(shù)變化如成像技術、還有一些其他全麻藥不宜使用的疾病,例如癲癇、顱內(nèi)壓增高、重癥肌無力、糖尿病等。

二、注射式麻醉 

一種既簡單方便,又能使動物很快進入麻醉期,而無明顯興奮期的方法。水合氯醛、戊巴比妥鈉、阿佛丁和氯胺酮是目前大小鼠實驗中最常用的注射類麻醉劑。 

1. 水合氯醛(Chloral hydrate)

特點:有效的鎮(zhèn)靜催眠藥,但本品麻醉劑量與中毒量很接近,所以安全范圍小,使用時要注意;另外對皮膚和黏膜有較強的刺激作用;

推薦用藥濃度及配比:一般配置濃度為4%~10%(質(zhì)量體積比,4-10g溶于100ml滅菌水),大小鼠用藥量為:300~500mg/kg。

2. 戊巴比妥鈉(Pentobarbital)

特點:臨床上常用,隨用量而產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、催眠和抗驚厥效應,大劑量時則產(chǎn)生麻醉作用,常作為有效的鎮(zhèn)靜和麻醉劑。但它沒有鎮(zhèn)痛作用只有鎮(zhèn)靜作用,因此手術前配合鎮(zhèn)痛劑使用效果會更好;
推薦用藥濃度及配比:一般配置濃度為1%~3%,大小鼠用藥量為:40~70mg/kg。

3. 阿佛。ˋvertin)

特點:阿佛丁學名三溴乙醇,曾被推薦作為轉(zhuǎn)基因鼠傳代有關的外科手術(如胚胎移植和輸精管切除術)的麻醉劑;但配制較繁瑣,保質(zhì)期較短,保存時要防菌;      推薦用藥濃度及配比:一般配置濃度為1.2%-2.5%(100%濃儲液是10g阿佛丁與10mL 叔戊醇混合,使用時加滅菌蒸餾水稀釋至1.2%-2.5%,4℃冷藏可保存2周;大小鼠用藥量為:125~400mg/kg。

4. 氯胺酮(Ketamine)

特點:一種鎮(zhèn)痛麻醉劑,注射后很快產(chǎn)生麻醉作用,使動物進入淺睡眠狀態(tài),麻醉的安全性相對較高;適用于各種表淺、短小手術麻醉及全身復合麻醉;
推薦用藥濃度:大小鼠用藥量為:100~150mg/kg。

5. 舒泰50

一種進口混合麻醉劑,麻醉效果非常,價格較貴
如下為上述幾種麻醉劑的比較:
注:上述藥品在大小鼠中一般采用腹腔注射方式,快速吸收,見效快!注射部位宜選在腹部后1/3處略靠外側(cè)(避開肝和膀胱)

                    

三、局部麻醉

局麻是指在手術的局部麻醉或者緩解局部疼痛和瘙癢時使用,優(yōu)點是動物在麻醉期間能保持清醒,對重要臟器功能干擾輕微,麻醉并發(fā)癥少,是一種較安全的麻醉方法。目前常用的局部麻醉劑有普魯卡因、利多卡因和丁卡因。如下為這三類的比較[4]:

注:局麻一般采用浸潤麻醉方法,操作時,動物固定好后,首先在局部皮膚用皮頭針先作皮內(nèi)注射,形成橘皮樣丘疹,然后換成局部麻醉長針頭,由皮點進針,放射到皮點周圍繼續(xù)注射,直到要求麻醉區(qū)域的皮膚都浸潤為止;可以根據(jù)實驗操作要求的深度按照皮下、筋膜、肌肉、腹膜或骨膜的順序,依次注射麻藥,以達到麻醉神經(jīng)末梢的目的。

 麻醉過程中常遇到的問題: 

1. 麻醉時需要注意什么?

1)注意保溫:動物在麻醉期間體溫易下降,可將動物置于循環(huán)水恒溫墊上進行保溫;

2)注意觀察:使用麻醉劑過程中隨時檢查動物的反應情況,如隨時觀察動物的肌張力、角膜反射、呼吸頻率、夾痛反射等指標,避免動物出現(xiàn)死亡;

3)注意給藥劑量:配制的藥液濃度要適中不可過高,以免麻醉過急造成動物死亡;但也不能過低,以減少注入溶液的體積。除參照一般標準外,還應考慮個體對藥物的耐受性不同,而且體重與所需劑量的關系也并不是絕對成正比的。一般說,衰弱和過胖的動物,其單位體重所需劑量較小。

2. 如何確認動物已完全麻醉?

以小鼠為例,麻醉起效:小鼠仰臥時心跳及呼吸均勻、肌肉松弛、四肢無活動,胡須無觸碰反應,踏板反射消失,即視為達到完全麻醉狀態(tài)。若小鼠的前肢開始抖動即判定為開始復蘇。手術過程中如果發(fā)現(xiàn)動物抽搐、排尿,說明麻醉過深,應立即進行急救。

3. 若小鼠出現(xiàn)復蘇跡象怎么辦?

若實驗還沒有完成,小鼠接近蘇醒,需及時將麻醉瓶(氣麻)放在動物口、鼻處,給予輔助吸入麻醉或可臨時適當補加麻醉劑,一般每次補加劑量不超過注射總量的1/10∼1/5。

4. 給藥方式一般除了腹腔注射還有哪些?

非吸入麻醉常采用的注射方法有:靜脈注射,肌肉注射,腹腔注射等。靜脈與肌肉注射多用于較大的動物,如犬、貓、豬、犬等;靜脈注射的部位多是耳緣靜脈(家兔、貓、豬)、后肢靜脈(犬)及尾靜脈(大、小鼠);肌肉注射的部位多選用臀部。腹腔注射多用于較小的實驗動物,如大鼠、小鼠、沙鼠、豚鼠等。

5. 吸入式麻醉和注射式麻醉如何選擇?

1)吸入麻醉的優(yōu)缺點:較好的控制麻醉深度,快速進入麻醉狀態(tài),蘇醒迅速、平穩(wěn),對肝、腎功能影響輕微;但揮發(fā)性麻醉藥被人體長期吸入后會對醫(yī)護人員造成身體上的傷害,且每種揮發(fā)性麻醉藥的揮發(fā)罐的價格昂貴。
2)非吸入麻醉的優(yōu)缺點:操作簡便,無需特殊的麻醉裝置,與吸入麻醉相比成本較低。但不能靈活掌握用藥的劑量、麻醉深度以及麻醉維持時間,且麻醉藥物需要通過肝臟代謝,腎臟排出,因此相比之下對肝臟和腎臟的影響較大。
總之,吸入麻醉麻醉藥安全性高,副作用低,安全可控;相比之下非吸入麻醉藥對呼吸、心率及血氧飽和度等指標影響較大,因此安全性相對較低。在臨床上如果條件允許,吸入麻醉是最理想的選擇。


參考文獻

[1] Ruizmeana M, Martinson E A, Garciadorado D, et al. Animal ethics in Cardiovascular Research[J]. Cardiovascular Research, 2012, 93(1): 1-3.            [2] Low L A, Bauer L C, Klaunberg B A, et al. Comparing the Effects of Isoflurane and Alpha Chloralose upon Mouse Physiology.[J]. PLOS ONE, 2016, 11(5).   
[3]王洋,陳克研,張賀,等.丙泊酚靜脈麻醉與異氟醚吸入麻醉在巴馬小型豬實驗中的比較[J].中國比較醫(yī)學雜志,2012,22( 7). 
[4]湯宏斌.《實驗動物學》(第三版)[M]. 湖北人民出版社,2016. 
[5]李 丹,郭玉瑩,鄧 昊,高 珊,徐士欣. 實驗動物麻醉劑使用的福利倫理問題研究進展[J]. 中國比較醫(yī)學雜志2017, 27( 9).

來源:北京萊艾特科技發(fā)展有限公司
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