適用實驗:研究表明,異氟烷麻醉能維持動物的心率、血氧分壓、血液pH等生理功能處于穩(wěn)定狀態(tài)[2],適合情況復雜且持續(xù)時間較長的動物實驗[3],包括連續(xù)監(jiān)測動物參數(shù)變化如成像技術、還有一些其他全麻藥不宜使用的疾病,例如癲癇、顱內(nèi)壓增高、重癥肌無力、糖尿病等。
二、注射式麻醉
一種既簡單方便,又能使動物很快進入麻醉期,而無明顯興奮期的方法。水合氯醛、戊巴比妥鈉、阿佛丁和氯胺酮是目前大小鼠實驗中最常用的注射類麻醉劑。
1. 水合氯醛(Chloral hydrate)
特點:有效的鎮(zhèn)靜催眠藥,但本品麻醉劑量與中毒量很接近,所以安全范圍小,使用時要注意;另外對皮膚和黏膜有較強的刺激作用;
推薦用藥濃度及配比:一般配置濃度為4%~10%(質(zhì)量體積比,4-10g溶于100ml滅菌水),大小鼠用藥量為:300~500mg/kg。
2. 戊巴比妥鈉(Pentobarbital)
特點:臨床上常用,隨用量而產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、催眠和抗驚厥效應,大劑量時則產(chǎn)生麻醉作用,常作為有效的鎮(zhèn)靜和麻醉劑。但它沒有鎮(zhèn)痛作用只有鎮(zhèn)靜作用,因此手術前配合鎮(zhèn)痛劑使用效果會更好;
推薦用藥濃度及配比:一般配置濃度為1%~3%,大小鼠用藥量為:40~70mg/kg。
3. 阿佛。ˋvertin)
特點:阿佛丁學名三溴乙醇,曾被推薦作為轉(zhuǎn)基因鼠傳代有關的外科手術(如胚胎移植和輸精管切除術)的麻醉劑;但配制較繁瑣,保質(zhì)期較短,保存時要防菌; 推薦用藥濃度及配比:一般配置濃度為1.2%-2.5%(100%濃儲液是10g阿佛丁與10mL 叔戊醇混合,使用時加滅菌蒸餾水稀釋至1.2%-2.5%,4℃冷藏可保存2周;大小鼠用藥量為:125~400mg/kg。
4. 氯胺酮(Ketamine)
特點:一種鎮(zhèn)痛麻醉劑,注射后很快產(chǎn)生麻醉作用,使動物進入淺睡眠狀態(tài),麻醉的安全性相對較高;適用于各種表淺、短小手術麻醉及全身復合麻醉;
推薦用藥濃度:大小鼠用藥量為:100~150mg/kg。
5. 舒泰50
一種進口混合麻醉劑,麻醉效果非常,價格較貴
如下為上述幾種麻醉劑的比較:
注:上述藥品在大小鼠中一般采用腹腔注射方式,快速吸收,見效快!注射部位宜選在腹部后1/3處略靠外側(cè)(避開肝和膀胱)
三、局部麻醉
局麻是指在手術的局部麻醉或者緩解局部疼痛和瘙癢時使用,優(yōu)點是動物在麻醉期間能保持清醒,對重要臟器功能干擾輕微,麻醉并發(fā)癥少,是一種較安全的麻醉方法。目前常用的局部麻醉劑有普魯卡因、利多卡因和丁卡因。如下為這三類的比較[4]:
注:局麻一般采用浸潤麻醉方法,操作時,動物固定好后,首先在局部皮膚用皮頭針先作皮內(nèi)注射,形成橘皮樣丘疹,然后換成局部麻醉長針頭,由皮點進針,放射到皮點周圍繼續(xù)注射,直到要求麻醉區(qū)域的皮膚都浸潤為止;可以根據(jù)實驗操作要求的深度按照皮下、筋膜、肌肉、腹膜或骨膜的順序,依次注射麻藥,以達到麻醉神經(jīng)末梢的目的。
麻醉過程中常遇到的問題:
1. 麻醉時需要注意什么?
1)注意保溫:動物在麻醉期間體溫易下降,可將動物置于循環(huán)水恒溫墊上進行保溫;
2)注意觀察:使用麻醉劑過程中隨時檢查動物的反應情況,如隨時觀察動物的肌張力、角膜反射、呼吸頻率、夾痛反射等指標,避免動物出現(xiàn)死亡;
3)注意給藥劑量:配制的藥液濃度要適中不可過高,以免麻醉過急造成動物死亡;但也不能過低,以減少注入溶液的體積。除參照一般標準外,還應考慮個體對藥物的耐受性不同,而且體重與所需劑量的關系也并不是絕對成正比的。一般說,衰弱和過胖的動物,其單位體重所需劑量較小。
2. 如何確認動物已完全麻醉?
以小鼠為例,麻醉起效:小鼠仰臥時心跳及呼吸均勻、肌肉松弛、四肢無活動,胡須無觸碰反應,踏板反射消失,即視為達到完全麻醉狀態(tài)。若小鼠的前肢開始抖動即判定為開始復蘇。手術過程中如果發(fā)現(xiàn)動物抽搐、排尿,說明麻醉過深,應立即進行急救。
3. 若小鼠出現(xiàn)復蘇跡象怎么辦?
若實驗還沒有完成,小鼠接近蘇醒,需及時將麻醉瓶(氣麻)放在動物口、鼻處,給予輔助吸入麻醉或可臨時適當補加麻醉劑,一般每次補加劑量不超過注射總量的1/10∼1/5。
4. 給藥方式一般除了腹腔注射還有哪些?
非吸入麻醉常采用的注射方法有:靜脈注射,肌肉注射,腹腔注射等。靜脈與肌肉注射多用于較大的動物,如犬、貓、豬、犬等;靜脈注射的部位多是耳緣靜脈(家兔、貓、豬)、后肢靜脈(犬)及尾靜脈(大、小鼠);肌肉注射的部位多選用臀部。腹腔注射多用于較小的實驗動物,如大鼠、小鼠、沙鼠、豚鼠等。
5. 吸入式麻醉和注射式麻醉如何選擇?
1)吸入麻醉的優(yōu)缺點:較好的控制麻醉深度,快速進入麻醉狀態(tài),蘇醒迅速、平穩(wěn),對肝、腎功能影響輕微;但揮發(fā)性麻醉藥被人體長期吸入后會對醫(yī)護人員造成身體上的傷害,且每種揮發(fā)性麻醉藥的揮發(fā)罐的價格昂貴。
2)非吸入麻醉的優(yōu)缺點:操作簡便,無需特殊的麻醉裝置,與吸入麻醉相比成本較低。但不能靈活掌握用藥的劑量、麻醉深度以及麻醉維持時間,且麻醉藥物需要通過肝臟代謝,腎臟排出,因此相比之下對肝臟和腎臟的影響較大。
總之,吸入麻醉麻醉藥安全性高,副作用低,安全可控;相比之下非吸入麻醉藥對呼吸、心率及血氧飽和度等指標影響較大,因此安全性相對較低。在臨床上如果條件允許,吸入麻醉是最理想的選擇。
參考文獻
[1] Ruizmeana M, Martinson E A, Garciadorado D, et al. Animal ethics in Cardiovascular Research[J]. Cardiovascular Research, 2012, 93(1): 1-3. [2] Low L A, Bauer L C, Klaunberg B A, et al. Comparing the Effects of Isoflurane and Alpha Chloralose upon Mouse Physiology.[J]. PLOS ONE, 2016, 11(5).
[3]王洋,陳克研,張賀,等.丙泊酚靜脈麻醉與異氟醚吸入麻醉在巴馬小型豬實驗中的比較[J].中國比較醫(yī)學雜志,2012,22( 7).
[4]湯宏斌.《實驗動物學》(第三版)[M]. 湖北人民出版社,2016.
[5]李 丹,郭玉瑩,鄧 昊,高 珊,徐士欣. 實驗動物麻醉劑使用的福利倫理問題研究進展[J]. 中國比較醫(yī)學雜志2017, 27( 9).