前幾天有“磚家”同學(xué)寫了兩篇《鼠年說(shuō)鼠》（一）和（二）。為了留作永久的學(xué)習(xí)材料，小編在經(jīng)過(guò)原作者同意后，現(xiàn)進(jìn)行轉(zhuǎn)載。本文將兩部分內(nèi)容融在一起，并對(duì)（一）和 （二）順序進(jìn)行了調(diào)換。
 

抗體藥發(fā)現(xiàn)的兩大礦場(chǎng)
 

抗體藥主要有兩個(gè)大礦場(chǎng)，一個(gè)是依賴于體外展示技術(shù)的全合成/半合成/天然抗體文庫(kù)礦，比較耳熟能詳?shù)氖莿�橋抗體技術(shù)公司（藥王阿達(dá)木單抗）、后來(lái)的Dyax和現(xiàn)在的MorphoSys（特諾雅®古塞奇尤單抗注射液）。著名的礦主有2018年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主溫特爵士（噬菌體展示平臺(tái)）和MIT教授、AdiMab聯(lián)合創(chuàng)始人K. Dane Wittrup教授（酵母展示平臺(tái)）。另一個(gè)礦是基于天然免疫系統(tǒng)的抗體發(fā)現(xiàn)。最初大家都是用野生鼠免疫結(jié)合雜交瘤技術(shù)來(lái)發(fā)現(xiàn)抗體，后來(lái)基因泰克的卡比利專利以及各種鼠源抗體人源化技術(shù)壁壘逼迫一些科學(xué)先驅(qū)另辟捷徑，這就開(kāi)啟了人源化抗體鼠的時(shí)代。比較知名的有Xenomouse（安進(jìn)的技術(shù)平臺(tái)），Velocimouse（再生元的技術(shù)平臺(tái)）、國(guó)內(nèi)最近出現(xiàn)的百奧賽圖的RenMab^TM鼠以及和鉑醫(yī)藥的H2L2鼠。

從基因泰克的發(fā)展看抗體藥成藥性如何突破？

經(jīng)過(guò)二十多年的發(fā)展，基于體外展示技術(shù)和合成抗體文庫(kù)的體外抗體發(fā)現(xiàn)撞了成藥性這個(gè)墻。最近七、八年整個(gè)領(lǐng)域都在反思到底問(wèn)題出在哪里，到底該怎么尋求突破？在對(duì)全合成抗體的成藥性的質(zhì)疑聲越來(lái)越強(qiáng)的時(shí)候，業(yè)內(nèi)大佬們也在抓緊時(shí)間布局。

您是否注意到最近四五年基因泰克在抗體發(fā)現(xiàn)上全面轉(zhuǎn)向了基于單細(xì)胞技術(shù)的體內(nèi)抗體發(fā)現(xiàn)。這是為什么呢？基因泰克在上世紀(jì)九十年代的抗體工程非常卓有成效，上市了美羅華(Rituxan)、曲妥珠(Herceptin)等抗體藥。但從2000年開(kāi)始大量投入基于噬菌體展示技術(shù)的高通量篩選以后，新藥產(chǎn)出效率卻大大下降�；�因泰克將何去何從？通過(guò)對(duì)一篇文章的解讀大家一起來(lái)看一下。
 

這篇文章（Hotzel I et al, 2013 mAbs）由基因泰克Paul Carter和Robert Kelley一起發(fā)表，文章中要解決的問(wèn)題只有一個(gè)：噬菌體展示出來(lái)的抗體在藥物動(dòng)力學(xué)(Pharmacokinetics)上是不是比人源化抗體差？
 

Fig. 1 52個(gè)抗體藥物及在研抗體在食蟹猴中清除速率的回溯性研究

 

圖Fig.1中Y軸是單抗藥在食蟹猴體內(nèi)的清除速率(mL/day/kg)，數(shù)值越大則藥物動(dòng)力學(xué)越差。X軸是52個(gè)已經(jīng)上市或者是在研的抗體藥物，包括大家耳熟能詳?shù)呢惙ブ閱慰�、美羅華單抗、曲妥珠單抗、奧馬珠單抗和帕妥珠單抗。在食蟹猴體內(nèi)的清除速率10mL/day/kg（圖中藍(lán)色虛線）可以做為一個(gè)藥物動(dòng)力學(xué)好壞的分界值。
 

噬菌體展示來(lái)的抗體（△）在食蟹猴體內(nèi)的清除速率的中位值是9.0mL/day/kg，人源化抗體（⚪）在食蟹猴體內(nèi)的清除速率的中位值是6.5mL/day/kg，作者表示在統(tǒng)計(jì)學(xué)上并無(wú)顯著性差異（P=0.28）。作者并沒(méi)有做兩者跟全人抗體的比較，可能由于全人抗體數(shù)據(jù)較少，但從有限的全人抗體數(shù)據(jù)來(lái)看，全人抗體（□）在食蟹猴體內(nèi)的清除速率的中位值大概是3.1mL/day/kg，大家可以自行做個(gè)比較判斷（Fig 2a）。雖然文中沒(méi)有特意做數(shù)據(jù)差異比較，但相信這個(gè)發(fā)現(xiàn)應(yīng)該也讓Paul Carter和Robert Kelley非常震驚。因?yàn)榛�因泰克�?013年以后在抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)路線上的布局發(fā)生了變化，他們開(kāi)始摒棄基于噬菌體展示的全合成抗體發(fā)現(xiàn)，并且大力投入基于單細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)技術(shù)的體內(nèi)抗體發(fā)現(xiàn)。
 

當(dāng)然藥物動(dòng)力學(xué)是個(gè)很復(fù)雜的東西，影響因素很多，雖然此研究可能某方面不夠嚴(yán)謹(jǐn)，但對(duì)于做商業(yè)決策來(lái)說(shuō)，已經(jīng)足夠高大上了，基因泰克抗體發(fā)現(xiàn)理念也是非常讓人贊同：那就是在抗體發(fā)現(xiàn)的早期來(lái)解決成藥性問(wèn)題。
 

Fig. 2. 抗體人源化以及親和力工程改造對(duì)藥物動(dòng)力學(xué)的影響

 

這篇文章還有一個(gè)非常有意思的數(shù)據(jù)，Paul Carter和Robert Kelley選用了一個(gè)抗體（抗體47）來(lái)說(shuō)明抗體工程化改造對(duì)體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)的影響�？贵w47是基因泰克早期發(fā)現(xiàn)的一個(gè)抗人成纖維生長(zhǎng)因子的抗體，經(jīng)小鼠免疫獲得。圖Fig. 2B，抗體47c相對(duì)于原生抗體序列來(lái)說(shuō)只除去了一個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn)，在食蟹猴體內(nèi)的清除速率是4.2 mL/day/kg （n=4）。抗體47b是在47c的基礎(chǔ)上又做了親和力優(yōu)化，在食蟹猴體內(nèi)的清除速率分別是9.3和8.2 mL/day/kg （n=2）�？贵w47是在47c的基礎(chǔ)上做了親和力優(yōu)化和化學(xué)穩(wěn)定性優(yōu)化，在食蟹猴體內(nèi)的清除速率是20.4 mL/day/kg （n=4）。這個(gè)數(shù)據(jù)充分說(shuō)明了一個(gè)問(wèn)題，那就是經(jīng)過(guò)體內(nèi)免疫系統(tǒng)所發(fā)現(xiàn)的抗體的藥物動(dòng)力學(xué)是最好的，體外的工程學(xué)優(yōu)化對(duì)于體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)不但沒(méi)有多少幫助，而且越做越糟。
 

上面這兩個(gè)數(shù)據(jù)告訴大家：
 

（1）經(jīng)過(guò)體內(nèi)系統(tǒng)所發(fā)現(xiàn)的抗體的藥物動(dòng)力學(xué)是無(wú)可比擬的。體內(nèi)系統(tǒng)所發(fā)現(xiàn)的抗體經(jīng)過(guò)了免疫系統(tǒng)的正向選擇和負(fù)向選擇，抗原識(shí)別的專一性以及抗體的理化特性都是最好的。相比而言，用體外合成抗體文庫(kù)所發(fā)現(xiàn)的抗體或多或少會(huì)存在抗原識(shí)別的多特異性問(wèn)題，在抗體的理化特性上也不盡如人意。
 

（2）抗體的工程化改造。如果抗體需要做工程化改造的話，那就請(qǐng)最專業(yè)的團(tuán)隊(duì)用最專業(yè)的技術(shù)，結(jié)合抗體工程和蛋白結(jié)構(gòu)、分子模擬來(lái)優(yōu)化抗體的親和力、穩(wěn)定性和理化特性。
 

結(jié)合以上兩點(diǎn)，您再仔細(xì)想一想抗體發(fā)現(xiàn)，如果想得到成藥性最好的抗體并且盡可能的避免體外工程化改造，那目前最好的技術(shù)平臺(tái)就是人源化抗體鼠。
 

RenMab鼠這座礦脫穎而出
 

眾多人源化小鼠礦中，RenMab^TM小鼠從本專業(yè)挖礦磚家的眼中脫穎而出。那就讓磚家從抗體發(fā)現(xiàn)角度為大家解讀一下RenMab^TM小鼠這座礦與其他人源化小鼠礦相比究竟有什么獨(dú)特之處？
 

經(jīng)過(guò)一番仔細(xì)調(diào)查研究（某些制藥公司的專利讀起來(lái)真讓人頭疼），磚家總結(jié)了以下幾點(diǎn)：
 

（1）  人源化抗體鼠的構(gòu)建方式不同。
 

百奧賽圖用自有知識(shí)產(chǎn)權(quán)的技術(shù)進(jìn)行了原位替換，用人的整個(gè)抗體基因區(qū)全面替換了鼠的抗體基因區(qū)。再生元的Velocimmune鼠也使用了原位替換的方式，不同的是再生元做的是基于細(xì)菌假染色體的多個(gè)片段并且多個(gè)進(jìn)程的同源重組。同源重組的構(gòu)建方式導(dǎo)致了一些抗體多變區(qū)或者是調(diào)控元件的失活（McDonald L.E. et al, 2014 PNAS; Murphy A.J. et al, 2014 PNAS）。同樣的失活在其它人源化抗體鼠比如Kymab鼠中也被觀測(cè)到（Lee E.C., 2014 Nat. Biotechol）。原位替換的方式確保了人源化抗體鼠的免疫應(yīng)答和野生鼠相似。相對(duì)于原位替換，其它的方式包括原位敲除鼠基因再插入人基因或者是敲除/失活鼠基因再異位插入人基因（Trianni鼠，Xenomouse鼠等等），這都或多或少影響了轉(zhuǎn)基因小鼠的正常免疫應(yīng)答，比較有名的例子是AlivaMab鼠。
 

（2）  全區(qū)段原位替換最大程度地保證了抗體生成的多樣性。
 

前面提到的敲除再插入的方式不可避免地會(huì)限制V區(qū)的選擇，在某個(gè)可變區(qū)基因有多個(gè)拷貝或者突變型的情況下，只能選有代表性的V基因插入。多片段、多進(jìn)程的方式會(huì)造成一些V基因的失活。原位敲除再異位插入會(huì)失去天然的抗體V（D）J重組的調(diào)控機(jī)制。RenMab^TM鼠的整個(gè)V區(qū)應(yīng)該是所有的抗體人源化鼠中最天然的最接近于人的，人天然抗體基因的拷貝數(shù)、內(nèi)在的各V區(qū)之間的原生調(diào)控序列以及各種突變型都被最大限度地保持。RenMab^TM鼠全區(qū)段原位替換的構(gòu)建方式保證了RenMab^TM鼠正常的與野生鼠相似的免疫應(yīng)答和抗體生成的多樣性。
 

有看官會(huì)問(wèn)，我明白你在說(shuō)什么，那小鼠的抗體V（D）J重組機(jī)制和人的原生調(diào)控序列兼容嗎？這是個(gè)非常出色的問(wèn)題，也是學(xué)術(shù)界孜孜以求的一個(gè)研究方向。在解讀RenMab^TM鼠的抗體V（D）J重組機(jī)制和人的原生調(diào)控序列兼容之前，咱們先看看RenMab^TM鼠發(fā)育正常嗎？
 

RenMab^TM小鼠的免疫系統(tǒng)發(fā)育
 

人源化抗體鼠的主要用途是用在新藥研發(fā)上的全人源抗體發(fā)現(xiàn)，如果RenMab^TM鼠的免疫系統(tǒng)發(fā)育缺陷，不能正常地產(chǎn)生抗體，或者是不能以正常的方式產(chǎn)生抗體（比如AlivaMab鼠），那就失去了其存在的意義。
 

RenMab^TM鼠目前來(lái)看是個(gè)六能鼠，能吃、能喝、能拉、能睡、能生和能產(chǎn)生抗體，在小鼠的日常維護(hù)中不需要特殊條件/照顧，從側(cè)面證明了RenMab^TM鼠發(fā)育正常。
 

從科學(xué)數(shù)據(jù)上來(lái)看呢？
 

首先從外觀上（Fig. 3A），RenMab^TM鼠體重（上）以及脾臟形態(tài)大�。ㄏ拢�無(wú)顯著性差異（n=3）。其它器官比如心臟、胸腺、肝臟、肺臟和腎臟等也無(wú)顯著性差異（數(shù)據(jù)未顯示）。這說(shuō)明RenMab^TM鼠和野生鼠在器官發(fā)育上完全一致。小鼠B細(xì)胞在骨髓中發(fā)育成熟，然后離開(kāi)進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，定居于脾臟和淋巴結(jié)。下面以脾臟中的免疫細(xì)胞的類型、脾臟中T1，T2和成熟B細(xì)胞的比例等來(lái)判斷RenMab^TM鼠的B細(xì)胞發(fā)育情況。從Fig. 3B來(lái)看，無(wú)論是在RenMab^TM雌鼠中還是雄鼠中，在CD45⁺的細(xì)胞群體中，B細(xì)胞，NK細(xì)胞和T細(xì)胞的比例基本相同（n=3）。在T細(xì)胞中，CD4⁺的T細(xì)胞 和CD8⁺的T細(xì)胞的比例，RenMab^TM鼠和野生鼠沒(méi)發(fā)現(xiàn)顯著性差異。
 

進(jìn)一步分析脾臟中B細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)階段，在RenMab^TM鼠中，無(wú)論是雄鼠還是雌鼠，T1 B細(xì)胞（B220+IgM+IgD-）和T2 B細(xì)胞（B220+IgM+IgD+）的比例相對(duì)于野生鼠都有不同程度的升高，與此同時(shí)，成熟B細(xì)胞（B220+IgM^lowIgD+）在B220+細(xì)胞中的比例也有相應(yīng)下降（Fig. 3C）。這說(shuō)明在脾臟中B細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中存在T1/T2到成熟B細(xì)胞的阻滯。這個(gè)現(xiàn)象一點(diǎn)都不驚訝，已有文獻(xiàn)證明當(dāng)參與B細(xì)胞受體信號(hào)傳導(dǎo)的遺傳因素缺失時(shí)，會(huì)導(dǎo)致脾臟中T1/T2到成熟B細(xì)胞的發(fā)育阻滯（Loder F., wt al, 1999 J. Exp. Med.）。RenMab^TM鼠抗體V區(qū)的原位替換可能導(dǎo)致了某些遺傳因素的缺失并且這個(gè)缺失不能被人相應(yīng)位置的遺傳因素所補(bǔ)償，最終導(dǎo)致了T1/T2到成熟B細(xì)胞的發(fā)育阻滯。這種B細(xì)胞發(fā)育中的阻滯現(xiàn)象不會(huì)影響抗體生成，因?yàn)轭愃频默F(xiàn)象在其它人源化抗體鼠比如Trianni鼠、再生元的VelocImmune鼠、OmniRat鼠、AlivaMab鼠和KyMab鼠中也存在（Fig. 3D）（McDonald L.E. et al, 2014 PNAS; Murphy A.J. et al, 2014 PNAS；Lee E.C., 2014 Nat. Biotechol；Joyce C. et al, 2019 BioRxiv; Asensio M. et al, 2019, mAbs; Meining D. et al, Trianni conference presentation）。在Fig. 3D中，外周血中CD19+細(xì)胞的比例在野生鼠中是49.8%，但在Trianni kappa輕鏈?zhǔn)笾械谋壤�只�?8.4%，這也是T1/T2到成熟B細(xì)胞的發(fā)育阻滯的結(jié)果。尤其令人感興趣的是，RenMab^TM鼠和Trianni鼠都選用了類似的原位替換策略，這說(shuō)明導(dǎo)致人源化抗體鼠T1/T2到成熟B細(xì)胞的發(fā)育阻滯的遺傳因素就在被替換的鼠抗體V區(qū)中，并且很可能由于種屬差別，人的參與B細(xì)胞受體信號(hào)傳導(dǎo)的遺傳因素的插入并不能提供相應(yīng)的代償。另外一種可能是小鼠中參與B細(xì)胞受體信號(hào)傳導(dǎo)的遺傳因素仍然存在，但是由于人/鼠嵌合BCR和小鼠野生BCR信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制的細(xì)微差別（Mestas J. et al, 2004 J. Immunol.），導(dǎo)致了表達(dá)某些人BCR的鼠B細(xì)胞發(fā)育阻滯。從公眾數(shù)據(jù)庫(kù)中現(xiàn)有的人源化抗體鼠的多變區(qū)基因使用頻率來(lái)看，后一種可能性不大。
 

 

正如前面提到的，在各抗體人源化鼠中觀察到的B細(xì)胞發(fā)育阻滯并不影響人源化抗體鼠中抗體多樣性的生成以及所產(chǎn)生抗體的成藥性，免疫治療中很火的O藥就是一個(gè)例子。所以說(shuō)，我們看到的B細(xì)胞發(fā)育阻滯現(xiàn)象會(huì)是一個(gè)很好的科學(xué)研究方向，但對(duì)于人源化抗體鼠做為抗體發(fā)現(xiàn)的工具來(lái)說(shuō)卻是無(wú)傷大雅的。那有同學(xué)會(huì)問(wèn)，既然RenMab^TM鼠存在輕微的B細(xì)胞發(fā)育阻滯現(xiàn)象，那我怎么知道RenMab^TM鼠中抗體多樣性生成中V（D）J重排機(jī)制沒(méi)有受到影響呢？
 

RenMab^TM鼠的抗體V（D）J重組機(jī)制和人的原生調(diào)控序列兼容嗎？
 

抗體多樣性生成中重鏈的V（D）J重排和輕鏈的V-J重排發(fā)生在骨髓中，B細(xì)胞發(fā)育的Pro-B和Pre-B階段，那讓我們把目光從脾臟拉回到骨髓中的抗體多樣性生成�；卮鹕厦鎯晌煌瑢W(xué)的問(wèn)題，一是RenMab^TM鼠的抗體V（D）J重組機(jī)制和人的原生調(diào)控序列兼容嗎？二是B細(xì)胞發(fā)育的阻滯會(huì)不會(huì)造成RenMab^TM鼠中抗體多樣性生成中V（D）J重排機(jī)制的異常？回答這兩個(gè)問(wèn)題最好的辦法是用二代測(cè)序的方法去解讀未經(jīng)免疫的RenMab^TM鼠中的抗體多變區(qū)基因使用頻率。大家都知道編碼重鏈可變區(qū)的胚系基因分為三個(gè)基因家族：VH，DH和JH。其中VH有44種，DH有28種，JH有6種。當(dāng)發(fā)生V（D）J重排的時(shí)候，B細(xì)胞分別選用一個(gè)VH、DH和JH基因片段組成重鏈CDR3，所以，重鏈V（D）J重排至少有44*28*6種可能，再加上重輕鏈配對(duì)的可能、V-D和D-J結(jié)合區(qū)的突變以及抗體親和力成熟過(guò)程中的體細(xì)胞高頻突變，這共同形成了抗體生成中的多樣性。
 

從Fig. 4A中可以看到，從兩只RenMab^TM鼠中，發(fā)現(xiàn)了46種不同的VH基因（包括兩種VH假基因）。VH假基因在人外周血PBMC的免疫組庫(kù)中經(jīng)常被檢測(cè)到，其在抗體多樣性生成中的具體用途與意義不明。在RenMab^TM鼠的構(gòu)建中，是用人的全區(qū)段V區(qū)原位替換了鼠源的V區(qū)，兩種VH假基因的發(fā)現(xiàn)，從另一個(gè)側(cè)面也說(shuō)明了被構(gòu)建到RenMab^TM鼠中的人全區(qū)段V區(qū)能夠正常被鼠的V（D）J重排機(jī)制所使用。在人外周血PBMC中，通常情況下健康人的免疫組庫(kù)中~70%的VH是VH3和VH4。從Fig. 4A中可以看到，RenMab^TM鼠中VH3和VH4基因家族的使用頻率和人外周血中是非常類似的。同樣的，在兩只鼠中我們觀測(cè)到至少25種不同的DH基因，在四只鼠中檢測(cè)到38種不同的VK基因（Fig. 4B）。所有的人JH和JK基因家族都被觀測(cè)到（Fig. 4C, Fig. 4D），并且人JH/JK基因在RenMab^TM鼠中的使用頻率與人外周血PBMC中的使用頻率非常類似。請(qǐng)小伙伴們注意的是，圖4中V基因使用頻率的數(shù)據(jù)的誤差棒比較大一些，這是由于RenMab^TM鼠個(gè)體之間的差異造成的。類似的個(gè)體間的差異在人體中也被經(jīng)常觀測(cè)到。從抗體發(fā)現(xiàn)的角度，這種個(gè)體之間的差異是個(gè)有利因素，因?yàn)椴煌�的RenMab^TM鼠可能會(huì)利用不同的V（D）J重排組合，從而增加了抗體生成的多樣性。
 

有同學(xué)會(huì)問(wèn)，你VK基因使用頻率中，VK4-1稍微有點(diǎn)高呀？這個(gè)現(xiàn)象在再生元的Veloci鼠中也存在（感興趣的自己去讀再生元的專利）。在野生鼠中，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)重鏈V（D）J重排或者是輕鏈V-J重排的時(shí)候，野生小鼠的V（D）J重排機(jī)制會(huì)優(yōu)先選用最近的VH或者是VK（Brennecke A. et al, 2018 Front. Immunol.）。而在RenMab^TM鼠中，人VK4-1恰恰是離JK基因最近的。這從一個(gè)方面說(shuō)明，在小鼠V（D）J重排中近水樓臺(tái)先得月的機(jī)制是存在于被替換V區(qū)之外的。在小鼠的免疫應(yīng)答中，具有長(zhǎng)LCDR1的輕鏈基因比如mIGKV1-110或者mIGKV1-117經(jīng)常被優(yōu)先使用，做過(guò)鼠抗人源化的小伙伴們估計(jì)深有體會(huì)，通常的策略基于人鼠抗體結(jié)構(gòu)同源模擬是使用人VK2基因家族比如VK2-28或者是VK2-30做人源化，因?yàn)閂K2輕鏈抗體可以容納長(zhǎng)鼠源的LCDR1，實(shí)際上這是個(gè)很壞的選擇，要想知道這種情況下什么輕鏈基因最好? 為什么突然談到這一點(diǎn)？有心的小伙伴請(qǐng)去讀基因泰克最近十年的專利。
 

 

有同學(xué)說(shuō)，這數(shù)據(jù)只說(shuō)明了RenMab^TM鼠中存在所放進(jìn)去的V區(qū)基因呀，你怎么證明重鏈確實(shí)發(fā)生了V（D）J重排并且輕鏈發(fā)生了V-J重排呢？為回答這個(gè)問(wèn)題，請(qǐng)看下面的數(shù)據(jù)。

Fig. 5A是對(duì)未經(jīng)免疫的RenMab^TM鼠中抗體重鏈的CDR3長(zhǎng)度分布做了統(tǒng)計(jì)。眾所周知的是，野生型小鼠的抗體重鏈CDR3長(zhǎng)度分布的峰值在11-12氨基酸，而人外周血PBMC中抗體重鏈CDR3長(zhǎng)度分布的中位值在14.2左右。Fig. 5A說(shuō)明RenMab^TM鼠中抗體重鏈的CDR3長(zhǎng)度分布和人外周血PBMC中是非常類似的。更進(jìn)一步看RenMab^TM鼠中抗體重鏈的CDR3氨基酸組成分析，我們選用了一組14氨基酸長(zhǎng)度的抗體重鏈基因進(jìn)行分析。從Fig. 5B可以看出，RenMab^TM鼠中抗體重鏈的CDR3氨基酸組成和人外周血PBMC中是高度相似的。主要講以下幾點(diǎn)：
 

（1）首先，在IMGT107位置，已經(jīng)有很多研究證明在人外周血PBMC中此位置氨基酸使用偏向于天冬氨酸D、谷氨酸E和甘氨酸G。從圖中我們可以看到，天冬氨酸D、谷氨酸E和甘氨酸G在此位置的使用總頻率已經(jīng)達(dá)到60%左右。
 

（2）其次，最近多個(gè)對(duì)人外周血PBMC中免疫組庫(kù)二代測(cè)序的分析表明，隨著重鏈CDR3長(zhǎng)度增加，使用JH6的頻率也增加，這是因?yàn)镴H6是人JH基因家族中最長(zhǎng)的。JH6中富含酪氨酸Y，所以，造成的結(jié)果就是隨著重鏈CDR3長(zhǎng)度增加，酪氨酸Y的使用頻率也增加。Fig. 5B底部柱狀熱圖的紫色部分是酪氨酸Y，大家可以自行做個(gè)判斷，RenMab^TM鼠在此特征上是不是與人高度一致。
 

（3）野生鼠重鏈CDR3中是不存在二硫鍵的，因?yàn)橐吧�小鼠的DH基因不含有半胱氨酸的。在人、牛、鯊魚等物種中，二硫鍵的形成是重鏈CDR3多樣性形成的一個(gè)重要機(jī)制。在鼠中，這種機(jī)制是不存在的。在RenMab^TM鼠中，因?yàn)槿嗽碊H2基因家族的引入，在重鏈CDR3氨基酸組成中出現(xiàn)了半胱氨酸C。半胱氨酸C通常是以成對(duì)的形式出現(xiàn)，比如CXXC或者CXXXXC。
 

（4）如果對(duì)野生小鼠的重鏈CDR3氨基酸組成做個(gè)總分析，你會(huì)發(fā)現(xiàn)野生小鼠的重鏈CDR3氨基酸組成中甘氨酸G和絲氨酸S的比例很高，那是因?yàn)橐吧�小鼠DH基因中富含甘氨酸G和絲氨酸S。在人外周血PBMC的重鏈CDR3氨基酸組成中，甘氨酸G、天冬氨酸D和酪氨酸Y的使用頻率相對(duì)較高，在此背景下，請(qǐng)小伙伴們看氨基酸組成熱圖自行判斷RenMab^TM鼠生成抗體的質(zhì)量。
 

 

圖4和圖5應(yīng)該解決了同學(xué)們關(guān)于RenMab^TM鼠中是否能夠利用人抗體的V區(qū)基因產(chǎn)生可變區(qū)全人源抗體的疑問(wèn)。話不多說(shuō)，給出示兩個(gè)RenMab^TM鼠抗體發(fā)現(xiàn)實(shí)例：
 

和野生鼠一樣，RenMab^TM鼠能產(chǎn)生強(qiáng)免疫應(yīng)答
 

Fig. 6中顯示了用四種不同種類的抗原免疫野生鼠和RenMab^TM鼠的抗體滴度效價(jià)檢測(cè)結(jié)果。這個(gè)試驗(yàn)使用了經(jīng)典的“初始免疫-加強(qiáng)免疫”的免疫策略。從抗體滴度檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，四組RenMab^TM鼠都針對(duì)相應(yīng)的抗原產(chǎn)生了強(qiáng)免疫應(yīng)答。相對(duì)于野生鼠，RenMab^TM鼠抗原特異性的抗體滴度稍微弱一些，但是不會(huì)對(duì)抗體發(fā)現(xiàn)造成決定性的影響。如果您了解Trianni鼠的相應(yīng)數(shù)據(jù)（Trianni鼠比野生鼠免疫后抗體滴度低五倍），我想您睡覺(jué)都會(huì)笑醒。講到這里，RenMab^TM鼠這座礦到底是貧礦還是富礦小伙伴們心里都有數(shù)了。
 

 

百奧賽圖最近引入了美國(guó)Berkeley Lights公司的Beacon單細(xì)胞光導(dǎo)篩選平臺(tái)，結(jié)合RenMab^TM鼠，全人源抗體發(fā)現(xiàn)的進(jìn)程會(huì)大大縮短。Beacon單細(xì)胞光導(dǎo)篩選平臺(tái)結(jié)合體外噬菌體展示技術(shù)篩選RenMab^TM鼠免疫文庫(kù)會(huì)確保整個(gè)免疫組庫(kù)中所有抗原特異性的抗體都被一網(wǎng)打盡。此外，RenMab^TM鼠的兄弟：共同輕鏈?zhǔn)驲enLite已經(jīng)上線，VH納米鼠RenNano也很快會(huì)亮相。百奧賽圖RenMab^TM鼠、RenLite^TM鼠和RenNano^TM鼠三兄弟會(huì)滿足新藥研發(fā)的各種需求，不僅僅是傳統(tǒng)意義上的單克隆抗體，而且是單價(jià)雙特異性抗體。VH納米鼠RenNano^TM會(huì)使得新藥研發(fā)更具有穿透力，使得大分子藥滲透到實(shí)體瘤的內(nèi)部或者是穿過(guò)血腦屏障成為可能。
 

 

也就是說(shuō)，礦有了，礦脈找到了，最先進(jìn)的挖礦工具和理念具備了。下一步，您說(shuō)呢？還等什么，趕快收拾鋪蓋卷過(guò)來(lái)一起來(lái)百奧賽圖挖礦啊，再晚了鉆石開(kāi)采權(quán)就沒(méi)了。
 

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