淺析肺癌治療的潛在靶點(diǎn)-水通道蛋白4(AQP4)
肺癌是一種危害性較大的惡性腫瘤之一，探討肺癌的發(fā)病機(jī)制、尋找抗腫瘤治療新靶點(diǎn)是當(dāng)前肺癌治療研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白4（AQP4）在肺癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，而且敲降A(chǔ)QP4可明顯降低肺癌細(xì)胞遷移能力。作為一種廣泛用于蛋白檢測(cè)和分析的技術(shù)，Western印跡分析可以檢測(cè)細(xì)胞或者提取物中的蛋白表達(dá)水平。有研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋白4可以作為肺癌靶向治療的靶點(diǎn)。靶向治療是一種以腫瘤細(xì)胞特異性表達(dá)的基因產(chǎn)物作為治療靶點(diǎn)，從而最大程度地殺死腫瘤細(xì)胞，而盡量不對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用。
在1994 年，研究者從大鼠的肺組織中克隆出來的一種選擇性水轉(zhuǎn)運(yùn)體——AQP4 蛋白，它屬于汞不敏感性AQP 家族。研究者采用電鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn) AQP4 定位于肺組織的氣管、支氣管上皮及成纖維細(xì)胞的膜基質(zhì)側(cè)頂部，此外 AQP4 也存在于氣管、支氣管的柱狀上皮的基質(zhì)側(cè)，AQP4 在肺泡水的轉(zhuǎn)運(yùn)及氣道表面液體的調(diào)整中發(fā)揮重要作用。探討水通道蛋白4對(duì)肺癌細(xì)胞作用的研究，可以為肺癌靶向治療的研究提供豐富的研究信息。
采用免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、或者Western印跡分析方法都可以檢測(cè)組織標(biāo)本AQP4表達(dá)與分布情況。Western印跡分析方法又稱為蛋白質(zhì)印跡法，它是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)，既具有凝膠電泳的高分辨率又具備固相免疫測(cè)定的高特異性和高靈敏性。作為一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法，具有方法簡(jiǎn)便、標(biāo)本可長(zhǎng)期保存、結(jié)果便于比較等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)等領(lǐng)域。美迪西提供新藥研發(fā)外包服務(wù)，其生物部在體外生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)，通過酶水平測(cè)定、細(xì)胞水平測(cè)定、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、體外同位素測(cè)定、穩(wěn)定細(xì)胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術(shù)等，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。
為了研究水通道蛋白AQP4對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響及分子機(jī)制，研究者在肺癌細(xì)胞A549中，轉(zhuǎn)染AQP4的siRNAs后，采用CCK-8試劑盒檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖能力，采用Western Blotting方法檢測(cè)CCND1的蛋白水平，采用Real-time PCR方法檢測(cè)CCND1的mRNA水平[1]。研究表明，在肺癌細(xì)胞A549中，敲降A(chǔ)QP4的表達(dá)可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖能力，同時(shí)下調(diào)細(xì)胞周期蛋白CCND1的mRNA和蛋白水平。因此，AQP4可能成為肺癌治療的潛在靶點(diǎn)。
還有研究者探討了水通道蛋白AQP4對(duì)肺癌細(xì)胞遷移能力的影響[2]。方法是選取肺癌A549細(xì)胞株，采用AQP4小干擾RNA(sjRNAs)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，采用Transwell法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞遷移能力，采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin)、神經(jīng)型鈣黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表達(dá)水平，同時(shí)分析其對(duì)上皮問質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)敲降A(chǔ)QP4可抑制肺癌細(xì)胞A549遷移能力及EMT，上調(diào)E-cadherin表達(dá)水平并下調(diào)N-cadherin和Vimentin表達(dá)水平(p<0．05)。因此抑制AQP4表達(dá)可有效降低肺癌細(xì)胞A549遷移能力并抑制EMT，推測(cè)促進(jìn)EMT可能足AQP4的主要分子作用機(jī)制。
關(guān)于AQP4蛋白的研究還有很多，在此不一一列舉�？傊钊胙芯糠伟┲掳C(jī)制，并發(fā)現(xiàn)抗腫瘤治療的靶點(diǎn)，對(duì)肺癌的診斷以及治療方法的研究都具有重要的意義。
[1] 水通道蛋白AQP4對(duì)肺癌細(xì)胞增殖影響的研究 [J].
[2] 水通道蛋白4對(duì)肺癌細(xì)胞A549遷移能力的影響及其作用機(jī)制研究[J].
