基于病毒的生物制品生產(chǎn)中的切向流過濾應用

來自美國堪薩斯大學的科學家們在2019年第37期的《Vaccine》雜志上發(fā)表了題為“Stabilization and formulation of a recombinant Human Cytomegalovirus vector for use as acandidate HIV-1 vaccine”的文章。文中，研究人員指出減毒活疫苗/載體候選物天然較不穩(wěn)定，如果沒有明確的合適制劑、儲存條件和臨床操作方法，感染性滴度很有可能損失。在基于重組人體巨細胞病毒載體（rHCMV-1）的HIV-1候選疫苗的初步工藝開發(fā)中，在于4℃儲存并凍融后，可觀察到較大的載體滴度損失。所以，原文研究的目的是針對早期臨床試驗中的潛在使用，開發(fā)rHCMV-1的候選凍存液體制劑，以優(yōu)化凍融和短期液體穩(wěn)定性。

為此，研究人員開發(fā)了一種病毒穩(wěn)定性篩選程序，包括使用一種基于細胞的快速、體外免疫熒光聚焦方法，以定量病毒滴度。實驗評估了包括~50種賦形劑的數(shù)據(jù)庫，以確定其對凍融循環(huán)或持續(xù)數(shù)天的4℃孵育后病毒載體穩(wěn)定的影響。特定的添加劑包括糖和聚合物以及去除NaCl，以保護rHCMV-1避免凍融導致的病毒滴度損失。優(yōu)化的溶液條件降低了rHCMV-1在4℃液體狀態(tài)中的損失速率。評估了多種賦形劑組合后，設計了三種新的候選劑型。從降低rHCMV-1在5次凍融循環(huán)或30天4℃孵育后滴度損失來看，新候選劑型的穩(wěn)定性顯著提升。新劑型的開發(fā)有助于更快地開展早期臨床試驗。

文中，在生產(chǎn)rHCMV-1時，病毒感染于細胞工廠中培養(yǎng)的DAXX-siRNA轉(zhuǎn)染的MRC-5細胞，感染后12天，進行第二次DAXX-siRNA轉(zhuǎn)染，置換培養(yǎng)基。達到完整細胞病變效應（CPE）后，收獲上清液，離心澄清去除較大的細胞碎片，然后再以超濾和洗濾純化。澄清的病毒上清液先濃縮20倍，使用膜表面積1000cm²、孔徑50nm、內(nèi)徑0.5mm的聚砜材質(zhì)MiniKros^®中空纖維組件，之后再以切向流過濾方式立即換液12.5體積的TNS緩沖液，兩步操作中剪切均為2400S-1，平均TMP維持為1.5psi。鑒定物料的無菌性、遺傳一致性以及抗原表達。病毒儲存于-80℃，以做后續(xù)試驗準備。

原文：O.S.Kumru, S. Saleh-Birdjanis, L.R.Antunez, et al., Stabilization and formulation of a recombinant Human Cytomegalovirus vector for use as acandidate HIV-1 vaccine. Vaccine, 2019, 37: 6696-6706.

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