切向流過濾濃縮基于重組水泡口炎病毒的埃博拉病毒疫苗

瀏覽次數(shù)：1227　發(fā)布日期：2020-1-21　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

來自加拿大麥吉爾大學(xué)等的科學(xué)家們在2019年第37的《Vaccine》雜志上發(fā)表了題為“Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK293SF cells”的文章。文中，研究人員指出埃博拉病毒疾病目前仍是一種為國際社會(huì)關(guān)切的重點(diǎn)疾病，已有多篇文章報(bào)導(dǎo)了數(shù)種疫苗首選物在非人體靈長類動(dòng)物研究以及臨床試驗(yàn)中的積極結(jié)果，而其中最有前景的是rVSV-ZEBOV疫苗（基于重組水泡口炎病毒的埃博拉病毒Zaire株疫苗）。在此研究中，研究人員嘗試使用懸浮的HEK 293SF細(xì)胞和無血清培養(yǎng)基生產(chǎn)rVSV-ZEBOV，其目的是使用HEK 293SF生產(chǎn)平臺，建議工藝，優(yōu)化生產(chǎn)滴度，證實(shí)生產(chǎn)的可放大性以及所獲得物料在動(dòng)物模型中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的有效性。

文中，生產(chǎn)和純化用于動(dòng)物研究的rVSV-ZEBOV物料時(shí)，以2L搖瓶培養(yǎng)HEK 293SF細(xì)胞，工作體積600mL，培養(yǎng)至細(xì)胞密度1.88 x 10^6cells/mL，以MOI 0.01感染，感染后48小時(shí)收獲培養(yǎng)液，加入10 U/mL Benzonase孵育，消解DNA和RNA。離心收獲含有rVSV-ZEBOV的上清液，使用63mm玻璃纖維預(yù)過濾器和0.45μm過濾器兩步過濾。濾液使用配有MWCO 750 kD 中空纖維組件的KrosFlo® Research 2i 切向流過濾系統(tǒng)濃縮40倍，濃縮的病毒再以碘克沙醇密度梯度離心純化，并以由10mM Tris組成并補(bǔ)充4%蔗糖的注射緩沖液洗濾7體積。樣品進(jìn)一步濃縮至3.5mL，然后加入人血清白蛋白至終濃度2.5 g/L，以確保凍存時(shí)，注射緩沖液中的純化病毒的穩(wěn)定性。

原文：J.Gelinas, H.Azizi, S.Kiesslich, et al., Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK 293SF cells. Vaccine, 2019, 37: 6624-6632.