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如何從細(xì)胞和組織提取物中有效分離和富集K48-多聚泛素?

瀏覽次數(shù):2651 發(fā)布日期:2019-10-25  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

前情回顧

【1】廣受歡迎的泛素蛋白抗體,VU-1,點(diǎn)擊了解

【2】通用的泛素化蛋白富集純化神器,TUBEs,點(diǎn)擊了解

【3】泛素化研究最常用的樣品制備抑制劑,PR-619,點(diǎn)擊了解

【4】K63特異性去泛素化酶抑制劑,1,10 phenanthroline,點(diǎn)擊了解

【5】K63多聚泛素的分離和富集方案,點(diǎn)擊了解

【6】純化k63泛素鏈修飾的蛋白質(zhì),就是這么簡(jiǎn)單。點(diǎn)擊了解

【7】泛素研究中的各色產(chǎn)品,LifeSensors您值得擁有,點(diǎn)擊了解

泛素(Ubiquitin,Ub)對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,對(duì)它們的區(qū)室化,降解和功能產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響。單個(gè)Ub與靶蛋白的結(jié)合被稱為單泛素化,另外的Ub部分可以與該初始Ub綴合,形成多聚泛素(polyUb)鏈。這些polyUb鏈通過(guò)Ub的C末端與靶蛋白的賴氨酸之間形成異肽鍵而連接。PolyUb鏈本身通過(guò)各個(gè)單體Ub單元之間的類似綴合機(jī)制形成,并且可以通過(guò)Ub中存在的所有賴氨酸(K6,K11,K27,K29,K33,K48和K63)連接。

兩種表征的最充分的多泛素化形式是通過(guò)連接在賴氨酸48(K48)或賴氨酸63(K63)上發(fā)生的。K48連接多聚泛素化最常見(jiàn)的后果是蛋白酶體介導(dǎo)的降解,而K63連接的多泛素化修飾與其他細(xì)胞過(guò)程有關(guān),DNA損傷反應(yīng)的調(diào)節(jié),胞內(nèi)分選,錯(cuò)誤折疊/聚集蛋白的自噬和神經(jīng)變性。其它賴氨酸的多聚泛素蛋白連接尚不顯著,其生理作用仍然大部分未知。 

什么是TUBE

TUBE(Tandem Ubiquitin Binding Entities, 串聯(lián)泛素結(jié)合實(shí)體),基于已知具有對(duì)泛素親和力的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域,經(jīng)過(guò)深度整合,創(chuàng)造性地開(kāi)發(fā)出了TUBEs結(jié)合實(shí)體。與單泛素結(jié)合相關(guān)結(jié)構(gòu)域(UBA)相比,TUBE對(duì)多泛素部分的親和力可增加高達(dá)1000倍。此外,TUBE對(duì)多泛素化蛋白質(zhì)具有保護(hù)作用,允許以相對(duì)低的豐度進(jìn)行檢測(cè)。這些特性有助于有效地“捕獲”多泛素化狀態(tài)的蛋白質(zhì)。

如何從細(xì)胞和組織提取物中有效分離和富集K48-多聚泛素以便用于蛋白質(zhì)組學(xué)的研究?艾美捷科技為您推薦由泛素研究的引領(lǐng)者-LifeSensors-推出的高品質(zhì)高性能的K48泛素鏈特異性的串聯(lián)結(jié)合實(shí)體(K48 TUBE HF),已被廣大泛素領(lǐng)域科學(xué)家廣泛使用。

產(chǎn)品名稱及描述

貨號(hào)

規(guī)格

偶聯(lián)物

K48 TUBE HF, GST

UM107

50µg/250µg

GST標(biāo)簽

K48 TUBE HF,  His6

UM207

50µg/250µg

His6標(biāo)簽

K48 TUBE HF, Biotin

UM307

50µg/250µg

生物素

K48 TUBE HF, Magnetic

UM407M

1 ml

磁珠

K48 TUBE HF, TAMRA

UM507T

50µg

TAMRA標(biāo)簽

K48 TUBE HF, Fluorescein

UM507F

50µg

熒光素標(biāo)簽

K48 TUBE HF, FLAG

UM607

50µg/250µg

Flag標(biāo)簽

PS:

與其它連接類型相比,K48泛素鏈特異性的串聯(lián)結(jié)合實(shí)體K48-TUBE HF(高保真的第二代)對(duì)K48鏈的多聚泛蛋白的親和力和選擇性會(huì)強(qiáng)上100倍,是一種極度靈敏且經(jīng)濟(jì)的工具。此外,LifeSensors公司對(duì)于K48-TUBE HF進(jìn)行了不同的標(biāo)簽修飾,可以滿足不同研究者的多樣化實(shí)驗(yàn)需求。

K48泛素鏈特異性的串聯(lián)結(jié)合實(shí)體優(yōu)點(diǎn):

  1. 對(duì)K48多聚泛素鏈的納摩爾親和力;

  2. 對(duì)K48多聚泛素鏈的親和力與其它所有連接相比高100倍;

  3. 與大多數(shù)泛素抗體相比,TUBE對(duì)多聚泛素的親和力更高;

  4. 避免表位標(biāo)記的泛素過(guò)表達(dá)導(dǎo)致下拉。

【廠家測(cè)試結(jié)果——UM607】:

【廠家測(cè)試結(jié)果——UM107,UM207,UM307,UM407M】:

真實(shí)客戶評(píng)論:

“我的實(shí)驗(yàn)室最近發(fā)表了兩篇文章,報(bào)告了FLAG-K63和FLAG K48 TUBE試劑的使用。我們使用這些試劑來(lái)研究細(xì)胞E3連接酶MARCH8對(duì)丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)性跨膜蛋白(HCV)的泛素化作用。這些試劑具有很高的選擇性和易操作性,有助于我們表征特定的泛素修飾。”- Shirit Einav博士,斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物和免疫學(xué)系副教授

LifeSensors成立于1996年,位于美國(guó)賓夕法尼亞州費(fèi)城,是一家為藥物發(fā)現(xiàn)與研究提供方法和可行性技術(shù)方法的生物技術(shù)公司。公司致力于為泛素和泛素蛋白酶體通路研究領(lǐng)域提供高品質(zhì)的抗體、酶、蛋白質(zhì)等試劑和試劑盒,產(chǎn)品最全、最新,是泛素研究者的最佳選擇。其原核和真核蛋白表達(dá)系統(tǒng)SUMOpro和SUMOstar已被世界范圍內(nèi)的學(xué)術(shù)、政府研究機(jī)構(gòu)和制藥、生物技術(shù)公司廣泛應(yīng)用。通過(guò)提供創(chuàng)新的研究工具,LifeSensors已成為泛素和泛素樣蛋白途徑的領(lǐng)導(dǎo)者。

艾美捷科技與國(guó)內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商保持著密切的合作關(guān)系,目前已成為眾多國(guó)際知名品牌的中國(guó)總代理或一級(jí)代理,主要包括:AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Abbkine、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一時(shí)間為用戶提供最前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。

作為L(zhǎng)ifeSensors在中國(guó)的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供最全面的LifeSensors產(chǎn)品以及訂制服務(wù)。

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