胍丁胺對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的干預(yù)效應(yīng)及機(jī)制

摘要：
目的：觀寮胍丁胺(AGM)對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛(ⅠNP)模型大鼠的干預(yù)效應(yīng),并探討其可能的機(jī)制。

方法：將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組各8只,除對(duì)照組外其余各組單次腹腔注射鏈脲佐菌素65mg/kg構(gòu)建糖尿病模型;足底觸痛伩測(cè)量糖尿病大鼠杋械縮足閾偵(\wT)和熱縮足潛伏期(Tw),降嘔〉20%基礎(chǔ)閾值視為DNP大鼠模型制爺成功。ACM50組、ACM300組、GP組分別腹腔注射AGM150、300mg/kg和加巴噴丁100mg/g,對(duì)照組、模型組腹腔注射等量生理鹽水。分別于STZ注射前1d(0d),SYZ注射后7、14、21、28d,取尾靜脈血檢測(cè)血糖,爛底觸痛儀測(cè)量MWT、TWL:檢査后處死大鼠取脊髓組織,釆用 Western blotting法檢測(cè)磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶活性。結(jié)果與對(duì)照組比較,其他各組血糖均升高,MWT降低、TW.縮短(P均<0.01)。與模型組比較,AGM150組、AGⅥ300組于STZ注射后21、28d血糖降低(P<0.05或<0.01),GP組血糖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:AGM150組、AGM300組MwT(21、28d)升高、TW.(28d)延長(zhǎng)(P均<0.01),GP組21、28d時(shí)MWT升高TWL延長(zhǎng)(P<0.05或<0.01);于SIz注射后28d,模型組pERK蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.05),AGM450組、AGM300組、GP組大鼠脊髓pRK表達(dá)量均低于模型組(P<0.05或<0.01)。
結(jié)論：AGM具有明顯地調(diào)節(jié)血糖及鎮(zhèn)痛效應(yīng),其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與其對(duì)血糖的調(diào)節(jié)及抑制脊髓ERK蛋臼的活化有關(guān)
關(guān)鍵詞:糖尿病神經(jīng)病理性疼痛:胍丁胺;加巴曠丁;血糖:鎮(zhèn)痛作用;細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶∷大鼠 2.1各組大鼠血糖水平比較見表1。

2.3各組大鼠脊髓P玊RK表達(dá)比較與對(duì)照組大閾值,證明DNP大鼠模型制備成功。鼠脊髓p玊RK表達(dá)量(2460.55±10.41)比較,模型組pERK蛋白表達(dá)量(4431.22±434.78)增加的神經(jīng)遞質(zhì)/調(diào)質(zhì),參與多種疾病的病理過程,具有(P<0.05);與模型組比較,AGM150組(2422.35神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)、鎮(zhèn)痛,促細(xì)胞增殖,預(yù)防和治療阿片±145.42)、AGM30組(3375.4±304.38)、GP組所致軀體、精神依賴和復(fù)吸等重要藥理作用,有良好(2761.19±37.71)大鼠脊髓pRK表達(dá)量均降的開發(fā)前景及應(yīng)用價(jià)值。內(nèi)源性AGM可能通過激低(P<0.05或<0.01)。
 
3討論
 
DNP的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,目前尚缺乏確切的醋酸扭體實(shí)驗(yàn)中,外源性給予AGM可以觀察到明病因?qū)W解釋。約87%的糖尿病患者長(zhǎng)期承受著神顯的鎮(zhèn)痛活性。蘭忠平等采用蜜蜂毒新型炎經(jīng)病變所致的慢性疼痛,治療上主要依賴于改善患性痛模型,鞘內(nèi)同時(shí)注射AGM與嗎啡可發(fā)揮協(xié)同者血糖水平及促進(jìn)外周神經(jīng)損傷的修復(fù)。由于鎮(zhèn)痛作用。坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠海馬內(nèi)注射AGM(1疼痛是一種不愉快的主觀情感體驗(yàn),只能將疼痛閾值作為疼痛的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。研究表明,腹腔注射SⅣZ可能與海馬σ受體調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子α(TNFα)表可引起機(jī)械痛覺過敏和觸覺異常性疼痛凹。本研達(dá)減少有關(guān)間。本研究結(jié)果表明,AGM(150、300究采用單次腹腔注射SⅣZ65mg/kg制備糖尿病大mg/kg)能顯著提高DNP大鼠的MWT、延長(zhǎng)TWL,鼠模型,利用MWT、TWL作為疼痛指標(biāo),造模后大且AGM300mg/kg作用效果與GP相當(dāng),證明AGM鼠MWT、TWL均明顯下降,且降低幅度>20%基礎(chǔ)能減輕糖尿病大鼠神經(jīng)病理性疼痛。本硏究中AGM對(duì)DNP大鼠TWL的延長(zhǎng)效果沒有MWT增高的明顯,可能與儀器探頭接觸大鼠足部肉墊有關(guān)。
 
除了對(duì)大鼠行為學(xué)上的影響,本研究發(fā)現(xiàn)AGM(150、300mg/kg)均可降低DNP大鼠血糖水平,與Moldering等的研究結(jié)論一致。Ii等研究發(fā)現(xiàn),在細(xì)胞水平上,AGM對(duì)SZ誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞損傷具有抑制作用,可能與其激活咪唑啉受體I3亞型有關(guān)。這提示AGM可能通過激活咪唑啉受體,降低血糖水平來延緩DNP進(jìn)程,改善DNP癥狀。ERK家族有5個(gè)亞族,其中ERK1/2通過級(jí)聯(lián)信號(hào)將細(xì)胞外刺激傳遞至細(xì)胞核、磷酸化轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)節(jié)細(xì)胞功能,參與細(xì)胞增殖、分化、存活、死亡等神經(jīng)細(xì)胞重要功能的調(diào)控,在疼痛及痛覺過敏信號(hào)傳導(dǎo)過程中起重要作用。ERKl/2的磷酸化含量可反映多種刺激誘發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞的快速變化,是一種新型神經(jīng)細(xì)胞活動(dòng)的功能指標(biāo)。在多種病理性疼痛模型中,均發(fā)現(xiàn)ERK信號(hào)通路參與了脊髓水平傷害性信號(hào)調(diào)節(jié)和中樞敏感化的形成"。傷害性刺激使脊髓背角或背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞ERK發(fā)生磷酸化,磷酸化的ERK一方面通過磷酸化神經(jīng)細(xì)胞膜離子通道或受體,調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的興奮性;另一方面激活核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)傷害性刺激引起的靶基因表達(dá),介導(dǎo)疼痛及痛覺敏化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Han等2研究發(fā)現(xiàn),在大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(CCⅠ)模型中,脊髓背角pERK水平顯著上調(diào);早期鞘內(nèi)注射促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制劑U0126,可有效阻斷和延遲CCⅠ誘導(dǎo)的機(jī)械性異常性疼痛和熱痛覺過敏。秦曉輝等研究結(jié)果表明,AGM對(duì)甲醛所致大鼠疼痛反應(yīng)有明顯的鎮(zhèn)痛作用;并且,在甲醛致痛前預(yù)先給予AGM160mg/kg,能明顯抑制甲醛所致脊髓背角磷酸化ERK表達(dá)量的上調(diào)。以上研究提示,ERK信號(hào)通路可能在DNP中同樣起到了至關(guān)重要的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,AGM(150、300mg/kg)可降低DNP大鼠脊髓ERK磷酸化水平。這提示AGM對(duì)DNP大鼠的鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與抑制脊髓p￡RK的激活,減少脊髓內(nèi)傷害性信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)AGM為中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所承擔(dān)的重大新藥創(chuàng)制課題在研項(xiàng)目,目前尚未在國(guó)內(nèi)上市,故而國(guó)內(nèi)未有相關(guān)臨床應(yīng)用報(bào)道。在國(guó)外,已有研究表明高劑量硫酸胍丁胺方案(2.670g/d)可連續(xù)安全食用長(zhǎng)達(dá)5年,且在整個(gè)研究期間未出現(xiàn)不良反應(yīng)。研究表明,在膳食中添加AGM可用于緩解腰椎間盤相關(guān)神經(jīng)根病的疼痛,改善生活質(zhì)量。綜上所述,本研究基于大鼠DNP模型,揭示了AGM具有明顯地調(diào)節(jié)血糖及鎮(zhèn)痛效應(yīng),其鎮(zhèn)痛機(jī)制化有關(guān),為其臨床應(yīng)用奠定了一定的理論基礎(chǔ)。  
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