第1-11步

徠卡101

樣本的接收和轉移

從患者到病理學家，準備樣本進行診斷需要細心、經驗以及合理的流程。

 

徠卡特地為大家整理了取材、組織處理、包埋、切片以及染色等（常規(guī)、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡單地獲得實驗方案，避免錯誤的發(fā)生。

 

步驟一

避免機械性損傷

🙆 正確：小心移動組織，避免機械損傷。外科以及解剖過程中，在任何需要新鮮組織的情況下，都必需非常小心地采集組織樣本；

🙅 錯誤：組織在固定前由于擠壓和撕裂引起的機械損傷。

淋巴組織：典型的人為擠壓引起的損傷。在圖中表現為暗而變形的細胞核，以致其中一些細胞拉長而呈強的嗜堿性。

 

步驟二

避免樣本干燥

🙆 正確：避免樣本在固定前干燥。如果不能馬上進行固定的話，使用含生理鹽水的濕紗布覆蓋避免干燥；

🙅 錯誤：組織在固定前在吸水的材料表面放置一段時間。

這塊新鮮的組織剛從患者的體內取出。由于它被放在托盤中而且環(huán)境溫度較高，如果不馬上進行固定的話就會迅速變干引起組織損傷。

 

步驟三

避免熱損傷

🙆 正確：盡可能避免樣本局部過熱引起的損傷（一些灼燒損傷可能是沒法避免的）；

🙅 錯誤：一些不必要的局部過熱引起組織損傷，新鮮組織特別容易因此受損。

乳腺組織邊緣部分區(qū)域的細胞呈強嗜酸性并已丟失細胞核和細胞質詳情。其原因在于采集樣本過程中， 灼燒引起局部過熱而導致損傷，相鄰的腺體組織沒有受到影響。

 

步驟四

避免化學損傷

🙆 正確：外界化學物質（如：消毒劑）對新鮮組織的污染；

🙅 錯誤：還沒有經過固定的組織很容易被外界化學物質浸潤和破壞。

Monsel溶液（堿式硫酸鐵溶液）是一個典型的止血劑，用于控制活檢組織粘膜的血液流動，它能夠引起粘膜表面的血液凝固與細胞壞死。如果應用在活檢，則容易引起局部嗜堿性以及早期壞死的現象，從而導致病理改變。Monsel溶液損傷，常見于重新進行活檢取材或者手術切除后。圖A：H&E染色后的宮頸活檢圖以及圖B：用Perl染色后的組織表面表現出大量的鐵沉積，兩圖都能體現該現象。

 

步驟五

正確進行樣本標記

🙆 正確：組織樣本必需容易辨識，所有的樣本細節(jié)必需及時記錄清楚；

🙅 錯誤：組織樣本細節(jié)記錄延遲，信息提供不完整。

這塊新鮮的組織剛從患者的體內取出。由于它被放在托盤中而且環(huán)境溫度較高，如果不馬上進行固定的話就會迅速變干引起組織損傷。

 

步驟六

確保及時固定

🙆 正確：必需進行及時固定，如果樣本不能馬上進行固定的話，短時間內可以保存在4℃的冰箱中；

🙅 錯誤：固定延遲（組織結構在離體后就隨即開始發(fā)生變性）。

A. 此尸檢肝樣本（H&E）沒有及時固定，導致核界限以及細胞質細節(jié)不清楚，中心血管內出現大量細菌；
B. 此切片肌肉纖維組織的核染色質保存不完整，就是固定不及時引起的。

 

步驟七

使用合適的試劑和容器進行固定

🙆 正確：合適量的固定試劑（固定液和組織比例至少為20:1）放在合適大小的容器中，這可以避免新鮮組織損傷，確保高質量固定；

🙅 錯誤：組織樣本被擠在一個小的容器當中，導致樣本因沒有被全部覆蓋到而固定不充分。

大量組織擠在一個很小的容器中，組織擠在小的容器中可導致組織損傷、固定不充分。

 

步驟八

檢查固定液的pH值

🙆 正確：高質量固定試劑以及最優(yōu)的pH值；

🙅 錯誤：固定液質量差，pH值不明確。酸性的福爾馬林會很快與細胞內免疫球蛋白發(fā)生反應，產生蛋白交聯。而接近中性的福爾馬林溶液雖然也會和免疫球蛋白發(fā)生反應，但是反應速度會相對慢一點。進行染色前，需要進行修復，以恢復免疫球蛋白結構。

A. 使用了不合適的pH值，正常的福爾馬林緩沖液pH值必需在6.8-7.0之間。
B. 血管染色圖中有棕褐色顆粒狀沉淀，就是所謂的蛋白交聯（酸性福爾馬林引起）。酸性福爾馬林很容易形成這種蛋白交聯，特別是紅細胞。

 

步驟九

促進大標本的固定

🙆 正確：為了固定液能迅速的滲透入樣本中需要控制樣本的大小。大標本可以在采集后送到實驗室進行初步分割后固定（可以考慮切成多條以促進固定）；

🙅 錯誤：大組織樣本在取材前雖然延長了固定時間，但樣本中間還是可能沒有固定好或者有明顯的變形。

豬的心臟被切成多條，從而促進組織樣本的固定，這些碎條大概有4-5 mm厚。

 

步驟十

避免固定過度

🙆 正確：固定時間適宜-及時送檢；

🙅 錯誤：組織樣本固定時間有時候過長——組織樣本沒有按照不同的優(yōu)先時間進行轉移。

按照固定時間的先后送檢組織，尤其是含有冰凍標本的時候。

 

步驟十一

輕取樣本

🙆 正確：輕取樣本——保證質脆樣本形態(tài)完好；

🙅 錯誤：粗魯地拿取樣本——質脆樣本很容易受損。

樣本轉移過于粗魯，容器底部沉積了很多組織碎片。即便是組織致密的標本現在也成了組織碎片。

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