細(xì)胞遷移與侵襲全攻略
瀏覽次數(shù)：5215 發(fā)布日期：2019-7-3
來(lái)源：本站 僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)
|
|
小室操作處理的步驟
Step1.選擇水凝膠類型包被小室：
水凝膠主要分為兩種：動(dòng)物來(lái)源（如基質(zhì)膠、膠原蛋白膠、纖維蛋白膠）或是合成型水凝膠（如Vitrogel 3DTM）。以24孔板的小室為例，取70-100μl（體積量不需太多，剛好將聚碳酸酯膜浸濕即可）稀釋好的水凝膠，均勻涂抹在小室內(nèi)的膜進(jìn)行包被，37℃放置1-3 h左右(時(shí)間取決于選用的水凝膠類型)。
▲細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)圖示
Step2.制備細(xì)胞懸液:
將進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞消化下來(lái)，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次，用不含血清培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至5×104/ml -5×105/ml (根據(jù)實(shí)驗(yàn)決定細(xì)胞接種數(shù)量)。
Step3.接種細(xì)胞：
取100µl細(xì)胞懸液加入24孔板上層小室，24孔板下室一般加入600µl含20%FBS的培養(yǎng)基，避免下層培養(yǎng)液和小室間氣泡產(chǎn)生，氣泡會(huì)減弱下層培養(yǎng)液的趨化作用，如果不小心出現(xiàn)氣泡，需要將小室提起，將氣泡除去，再將小室放進(jìn)培養(yǎng)板。
Step4.培養(yǎng)時(shí)間：
培養(yǎng)時(shí)間由實(shí)驗(yàn)?zāi)康臎Q定，如細(xì)胞共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移以及細(xì)胞侵襲等多種方面的研究；細(xì)胞遷移與侵襲的能力，除了培養(yǎng)時(shí)間需要考慮外，也需考慮細(xì)胞的處理！
Step5.結(jié)果分析：
結(jié)束培養(yǎng)，取出小室，移除孔中培養(yǎng)液，用無(wú)鈣鎂的PBS洗2-3次，使用甲醇固定15-30分鐘后，將小室適當(dāng)風(fēng)干。用預(yù)備好的0.1%-0.5%結(jié)晶紫染色，再用棉簽輕輕擦掉內(nèi)層未遷移細(xì)胞，用PBS洗3次。在200倍或400倍顯微鏡視野下，隨機(jī)選擇五個(gè)視野拍照觀察并計(jì)數(shù)穿過(guò)膜后的細(xì)胞。
▲統(tǒng)計(jì)穿膜后細(xì)胞數(shù)量圖示 |
|
|
|
|
Reference
Transwell® Invasion Assays. Methods Mol Biol. 2011; 769:97-110 |
|
|
|
| 產(chǎn)品信息： |
 |
|
|
聯(lián)系我們
電話：021-58785545
網(wǎng)址：http://www.xpbiomed.com
郵箱：info@xpbiomed.com
地址：上海浦東新區(qū)祖沖之路1505弄80號(hào)1幢3樓
|
|
|
|
|
