帶你重新認識CD3e和人源化CD3e小鼠（B-hCD3e mice）

瀏覽次數(shù)：7452　發(fā)布日期：2019-5-8　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負

在這“草長鶯飛”的季節(jié)，帶你重新認識CD3e！

背景介紹

CD3e( CD3e molecule)編碼CD3-epsilon多肽，與CD3-gamma，-delta，-zeta和體細胞受體alpha/beta或gamma/delta共同構(gòu)成TCR-CD3復(fù)合物。此復(fù)合物在抗原識別和細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑方面起著非常重要的作用。近年來，利用人CD3和腫瘤相關(guān)抗原（TAA）的雙特異性抗體進行抗腫瘤治療手段被廣泛研究。

但由于小鼠CD3復(fù)合體的胞外區(qū)與人類種間同源性相對較低，人CD3特異性治療抗體不能有效激活小鼠效應(yīng)T細胞，需建立一個適合于評估人類CD3特異性治療的實驗動物模型。百奧賽圖人源化CD3e小鼠（B-hCD3e mice）,為雙抗的藥效驗證提供了有力工具。

TCR-CD3 complex and its signal pathway^[1]

mCD3e全人源化小鼠分析

將mCD3e全人源化替換為hCD3e，對純合后代脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)進行流式細胞分析，觀察小鼠T細胞發(fā)育是否正常。

以上研究結(jié)果表明，相對于野生型，hCD3e全人源化純合小鼠脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)中mCD3⁺細胞含量較低且CD4、CD8分化差異較大，表明全人源化策略致其T細胞發(fā)育過程受阻，此方案制備的小鼠不適于后續(xù)藥理藥效評價。

基于此，考慮到全人源化可能對mCD3e胞內(nèi)信號傳遞的影響，百奧賽圖重新優(yōu)化打靶方案，僅對mCD3e進行胞外區(qū)人源化改造，保留其鼠源的信號傳導(dǎo)功能，得到B-hCD3e mice.同樣對其純合后代脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)進行流式細胞分析，結(jié)果如下：

以上研究結(jié)果表明，mCD3e胞外區(qū)人源化純合小鼠(B-hCD3e mice)脾臟，胸腺，PBMC及淋巴結(jié)中，各細胞細胞比例與野生型小鼠相比無顯著差異，表明T細胞分化未受胞外區(qū)人源化改造影響。

不是所有人源化小鼠都能有正常功能，不是所有CD3人源化小鼠都叫B-hCD3e mice哦！

后續(xù)基于B-hCD3e mice模型的體外檢測及體內(nèi)藥效等實驗數(shù)據(jù)也進一步證明了該模型的優(yōu)勢所在，具體信息如下所示：B-hCD3e mice基本信息

基本信息

打靶策略

蛋白表達分析

流式分析結(jié)果顯示：野生型 C57BL/6 小鼠中檢測到mCD3⁺蛋白表達，純合B-hCD3e小鼠中檢測到hCD3⁺蛋白表達。

體外檢測CD3抗體激活T細胞

從野生型C57BL/6和純合B-hCD3e小鼠的脾細胞中分離T細胞 (n=4)，與抗CD3抗體(B-hCD3e, anti-hCD3；C57BL/6, anti-mCD3)及抗mCD28抗體孵育24h, 48h，72h。ELISA檢測IFN-γ and IL-2.

結(jié)果表明：IFN-γ 和 IL-2的表達水平在B-hCD3e和C57BL/6中無顯著差異。

CD3抗體藥效實驗

C57BL/6(A) 和B-hCD3e(B)接種MC38細胞系，待腫瘤體積約150±50mm³ 后分組（n=5），結(jié)果顯示：兩種小鼠模型中，mPD-1抗體均顯著抑制腫瘤生長，表明：胞外區(qū)人源化改造對B-hCD3e小鼠T細胞的胞內(nèi)信號傳遞無明顯影響。同時，hCD3e抗體顯著促進B-hCD3e小鼠腫瘤生長，而對C57BL/6小鼠腫瘤的生長基本無影響。進一步研究表明：給藥（hCD3e抗體）后出現(xiàn)AICD效應(yīng)，B-hCD3e小鼠T細胞被清除，進而促進腫瘤生長。

流式檢測外周血中B細胞和T細胞比例

結(jié)果顯示：hCD3抗體組中，由于hCD3e抗體引起AICD效應(yīng)，T細胞比例顯著降低。但B細胞比例無明顯變化。（A）與hIgG Ab相比，CD19細胞各組間無顯著性差異。（B）與hIgG Ab相比，h-CD3 Ab治療后血液中TCR-β%降低。

基于B-hCD3e小鼠的雙特異性抗體藥效實驗