小鼠胚胎成骨細胞前體細胞(MC3T3-E1)怎么養(yǎng)
瀏覽次數(shù):6422 發(fā)布日期:2019-3-26
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MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨細胞前體細胞
Catalogue No. |
C1047 |
Product Format |
a T25 flask |
Culture Properties |
貼壁 |
Complete Growth Medium |
89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 |
Atmosphere |
air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
Application |
Cells and cancer research |
NOTE |
FOR RESEARCH USE ONLY。 |
Components
Item |
Specifications |
a T25 flask |
2X106 |
Manual |
1 copy |
Operation steps for cell culture
1、吸走用于培養(yǎng)基,加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞;
2、吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面,培養(yǎng)瓶放 37 度培養(yǎng)箱消化;(細胞對于消化比較敏感,消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時即可終止,禁止消化到細胞完全漂浮。混勻細胞時盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
3、加入 6-8ml 完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細胞混勻;
4、將混勻的細胞 1000rpm(約 150g)離心 3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸 37 度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);
傳代比例: 不同細胞生長速度不一,具體傳代比例視細胞生長速度而定,大部分細胞適用
1:3-1:4 傳代,生長較慢的細胞可以 1:2 傳代。
Cell cryopreservation
1、凍存液:92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實驗室條件自行選擇)
2、降溫步驟:4 度 10min,-20 度 2h,-80 過夜后液氮保存。
Tips:
1、細胞經(jīng)過運輸后,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。貼壁細胞 可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900-1000rpm(約 150g)離心 3min,棄上清。加5mlPBS 重懸細胞,再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略 PBS 重懸的步驟;如果碎片很多,建議 PBS 多洗幾次。
2、細胞生長不均時,可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
3、細胞生長緩慢時,可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(最高不超過 20%),也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài), 選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4、不同細胞貼壁性差異比較大,所以消化時間差別較大,20s-10min 均有可能,具體以細胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準,嚴禁消化到細胞完全漂浮。
客戶消化過度導致細胞 死亡、漂浮、生長緩慢, 不提供免費售后服務。
5、干冰發(fā)貨均為兩支,客戶先復蘇一支,若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。
若 客戶同時復蘇兩支均狀態(tài)不佳, 我方不提供免費售后服務。
6、細胞狀態(tài)正常時,應盡快凍存細胞保種,凍存后應隨機抽取一支檢測凍存效果。
我方不對客戶 凍存細胞導致死亡負責, 客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務。
Notice:
客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們,細胞收到后 1 周內(nèi)沒有任何電話,或其他形式回訪, 默認為細胞質(zhì)量沒問題,之后出了任何問題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次,若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費補發(fā),細胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。