表型篩選是在植物育種過(guò)程中將植物表現(xiàn)的優(yōu)良性狀篩選出來(lái),并最終能夠固定在植株上,從而培育出優(yōu)良的品種。標(biāo)準(zhǔn)的生化檢測(cè)技術(shù),如分光光度法或高效液相色譜,已被用于植物育種過(guò)程中的表型篩選。這些方法結(jié)果準(zhǔn)確,但它們具有破壞性、耗時(shí)、勞動(dòng)密集且繁瑣、成本高,并且不能滿足大規(guī)模篩選程序的需要。
植物育種過(guò)程需要一種快速簡(jiǎn)便的工具來(lái)評(píng)估表型,從而可以對(duì)大量植物進(jìn)行非破壞性篩選,使得盡可能在篩選過(guò)程的早期識(shí)別出所需的個(gè)體。北京易科泰生態(tài)技術(shù)有限公司為廣大植物育種工作者提供了方便快捷的、非破壞性的表型篩選技術(shù)方案。
本技術(shù)方案主要包括高光譜成像分析、FluorCam葉綠素?zé)晒獬上穹治觥?br />
高光譜成像分析
高光譜成像(HSI)分析集成了光譜學(xué)和成像技術(shù),并已被用作非侵入性成像技術(shù),用于評(píng)估由葉片和冠層水平的非生物或生物脅迫引起的定量和定性變化。高光譜可選配不同波段范圍:400-1000nm、950-1700nm、1000-2500nm等,包括了可見光、近紅外、短波紅外等區(qū)域波段,可以對(duì)光合色素、葉片含水量和葉肉細(xì)胞等進(jìn)行觀察和研究。該技術(shù)已經(jīng)成功的用于植物高通量表型分析,以評(píng)估植物育種各個(gè)性狀。
FluorCam葉綠素?zé)晒獬上穹治?/strong>
葉綠素?zé)晒猓–hlF)已被廣泛和成功的用作預(yù)測(cè)植物對(duì)非生物和生物脅迫的生理反應(yīng)的工具,通過(guò)FluorCam葉綠素?zé)晒獬上穹治隹梢苑从持参锏墓夂仙磉^(guò)程、表型性狀的潛力,進(jìn)而篩選出感興趣的單個(gè)植株。
應(yīng)用案例
浙江大學(xué)、浙江農(nóng)科院、農(nóng)業(yè)部光譜學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究人員2018年4月共同發(fā)表在《Frontiers in Plant Science》雜志的文章中,應(yīng)用非破壞性的Specim高光譜成像技術(shù)、FluorCam葉綠素?zé)晒獬上窦夹g(shù)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)基因(TG)玉米與其親本野生型(WT)之間草甘膦耐受性的差異,并建立表型檢測(cè)模型。
轉(zhuǎn)基因草甘膦耐受(TG)玉米和相應(yīng)的野生型(WT)在達(dá)到3葉期(第二葉完全膨脹,第三葉出現(xiàn))時(shí),用水或草甘膦噴灑植物。處理后第2、4、6和8天評(píng)估草甘膦處理效果,記錄RGB成像、高光譜成像和葉綠素?zé)晒獬上駭?shù)據(jù)。
TG玉米對(duì)草甘膦具有高度耐受性,并且在噴灑草甘膦8天后未顯示出明顯的損傷,但是草甘膦處理8天后,WT的葉子出現(xiàn)褪綠和壞死。
基因型(TG與WT)和處理(水與草甘膦)之間存在明顯的平均光譜反射值差異。在400-780nm的可見光區(qū)域中,用草甘膦處理的WT植物在6天后具有比草甘膦處理的TG植物和WT對(duì)照植物更高的光譜反射值;在NIR區(qū)域(780-950nm),草甘膦處理的WT植物在6天后具有比草甘膦處理的TG和WT對(duì)照植物更低的反射值。
高光譜圖像隨草甘膦處理時(shí)間不同呈現(xiàn)不同變化,草甘膦處理早期TG和WT之間沒有明顯的形態(tài)變化(RGB成像),然而,對(duì)于高光譜成像,WT和TG植物之間的差異是顯而易見的,從藍(lán)色到紅色顯示草甘膦脅迫程度逐漸增加。
草甘膦處理影響WT玉米的PS II光化學(xué)效率,反映在顯著降低的Fv / Fm,qL,Qp和QY(圖4A)。對(duì)于TG玉米,草甘膦處理與WT對(duì)照相似(圖4B)。在WT和TG玉米之間觀察到Fv / Fm的局部變化(圖5)。在WT玉米對(duì)草甘膦的響應(yīng)過(guò)程中Fv / Fm降低,在草甘膦施用于WT玉米6天后第一次檢測(cè)到癥狀。
表1顯示了校準(zhǔn)和預(yù)測(cè)集獲得的識(shí)別精度。葉綠素?zé)晒庠诓莞熟⑻幚?天后,校準(zhǔn)組準(zhǔn)確值為97.78%,預(yù)測(cè)值為93.33%。高光譜的預(yù)測(cè)能力也是可接受的,校準(zhǔn)集準(zhǔn)確值為91.11%。建立在高光譜信息和葉綠素?zé)晒鈪?shù)上的檢測(cè)模型在施用草甘膦8天時(shí)獲得相同的識(shí)別結(jié)果。結(jié)果表明耐草甘膦的轉(zhuǎn)基因玉米可能是在草甘膦處理后6天鑒定。
高光譜成像和葉綠素?zé)晒獬上窬捎糜诤Y選和鑒定表型,以促進(jìn)植物育種。今后,應(yīng)進(jìn)一步研究更多植物,建立更精確、更穩(wěn)健的檢測(cè)模型,并將其應(yīng)用于植物育種工作中。此外,大量的表型以及分類(易感與抗性)預(yù)測(cè)的有效性應(yīng)當(dāng)被研究以證明基于高光譜和葉綠素?zé)晒獬上竦暮Y選的潛力。
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注:FluorCam葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)多種版本可供選擇,便攜式、封閉式、開放式、大型版、多光譜、樣帶掃描式等。