測(cè)定細(xì)菌的大小實(shí)驗(yàn)操作步驟

1．測(cè)微尺的構(gòu)造 顯微鏡測(cè)微尺是由目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)接物測(cè)微尺組成，目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻璃片，其中有精確的等分刻度，在5mm刻尺上分50份(圖14一lC)。目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度隨使用接目鏡和接物鏡的放大倍數(shù)而改變，因此在使用前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行標(biāo)定。
鏡臺(tái)測(cè)微尺為一專用中央有精確等分線的載玻片(圖14—1A)，一般將長(zhǎng)為1mm的直線等分成100個(gè)小格，每格長(zhǎng)0.0lmm即10μm，是專用于校正目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度的。

2．目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定 把目鏡的上透鏡旋開，將目鏡測(cè)微尺輕輕放在目鏡的隔板上，使有刻度的一面朝下。將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在顯微鏡的載物臺(tái)上，使有刻度的一面朝上。先用低倍鏡觀察，調(diào)焦距，待看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行，并使兩尺左邊的一條線重合，向右尋找另外一條兩尺相重合的直線(圖15—lB)。

3．計(jì)算方法
標(biāo)定公式：目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（μm）=兩條重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)×10÷兩條重合線間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)
例如，目鏡測(cè)微尺20個(gè)小格等于鏡臺(tái)測(cè)微尺3小格，已知鏡臺(tái)測(cè)微尺每格為10μm，則3小格的長(zhǎng)度為3×10=30μm，那么相應(yīng)地在目鏡測(cè)微尺上每小格長(zhǎng)度為3×10÷20=1.5μm。用以上計(jì)算方法分別校正低倍鏡、高倍鏡及油鏡下目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際長(zhǎng)度。

4．菌體大小的測(cè)定 將鏡臺(tái)測(cè)微尺取下，分別換上大腸桿菌及金黃色葡萄球菌玻片標(biāo)本，先在低倍鏡和高倍鏡下找到目的物，然后在油鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量菌體的大小。先量出菌體的長(zhǎng)和寬占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，再以目鏡測(cè)微尺每格的長(zhǎng)度計(jì)算出菌體的長(zhǎng)和寬。并詳細(xì)記錄于表15—1中。
例如，目鏡測(cè)微尺在這架顯微鏡下，每格相當(dāng)于1.5μm，測(cè)量的結(jié)果，若菌體的平均長(zhǎng)度相當(dāng)于目鏡測(cè)微尺的2格，則菌體長(zhǎng)應(yīng)為3×1.5μm=3.0μm。
一般測(cè)量菌體的大小，應(yīng)測(cè)定10～20個(gè)菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。