1、范圍
本標準規(guī)定了食品中溶血性鏈球菌的檢驗方法。
本標準適用于各類食品和食物中毒樣品中溶血性鏈球菌的檢驗，
2、規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單〔不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準．GB/T4789.28一2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑
3、設備和材料
3.1冰箱：O℃——4℃。
3.2恒溫培養(yǎng)箱：36℃士1℃。
3.3恒溫水浴鍋：36℃土1℃。
3.4顯微鏡：10*～l00*。
3.5均質器或滅菌乳缽。
3.6離心機：4000r/min。
3.7架盤藥物天平：0g——5009，精確至0.5g。
3.8滅菌試管：10mm*100mm、l6mm*160mm。
3.9滅菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。
3.10滅菌錐形瓶：100mL。
3.11滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。
3.12滅菌棉簽、鑷子等。
4、培養(yǎng)基和試劑
4.1葡萄糖肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一2003中4.1規(guī)定。在肉浸液肉湯內加人1％葡萄糖。
4.2肉浸液肉湯：按GB/T4789.28一2003中4.1規(guī)定。
4.3匹克氏肉湯：按GB/T4789.28一2003中4.62規(guī)定。
4.4血瓊脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6規(guī)定。
4.5人血漿。4.6 0.25%氯化鈣。
4.7 0.85％滅菌生理鹽水。
4.8桿菌膚藥敏紙片（含0.04單位）。
5、操作步驟
5.1樣品處理按無菌操作稱取食品檢樣25g（ml)，加人225mL滅菌生理鹽水，研成勻漿制成混懸液。
5.2培養(yǎng)將上述混懸液吸取5ml，接種于50ml工葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線接種于血平板。如檢樣污染嚴重，可同時按上述量接種匹克氏肉湯，經36℃ 土l℃ 培養(yǎng)24h接種血平板，置36℃ 士1℃ 培養(yǎng)24h,挑起乙型血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，然后觀察溶血情況及革蘭氏染色，并進行鏈激酶試驗及桿菌膚敏感試驗。
5.3形態(tài)與染色本菌里球形或卵圓形，直徑0.5um ——1um鏈排列，鏈長短不一，頰者4個～8個細胞組成，長者20個一30個，鏈的長短常與細菌的種類及生長環(huán)境有關；液體培養(yǎng)中易呈長鏈；在固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，不形成芽抱，無鞭毛，不能運動。
5.4培養(yǎng)特性該菌營養(yǎng)要求較高，在普通培養(yǎng)纂上生長不良，在加有血液、血清培養(yǎng)荃中生長較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長時管底呈絮狀或顆粒狀沉淀。血平板上菌落為灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5mm～0.75mm，為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌周圍有2mm—4mm。界限分明、無色透明的溶血圈。
5.5鏈激酶試驗致病性乙型溶血性鏈球菌能產生鏈激酶（即溶纖維蛋白酶），此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，使成血漿蛋白酶，而后溶解纖維蛋白。吸取草酸鉀血漿0.2ml，加0.8ml滅菌生理鹽水，混勻，再加人18h～24卜、36℃ 士1℃ 培的鏈球菌培養(yǎng)物0.5 m及0.25％氯化鈣0.25ml（如氯化鈣已潮解，可適當加大至0.3%——0.35 %)振蕩搖勻，置于36℃ 士1℃ 水中10min，血漿混合物自行凝固（凝固程度至試管倒置，內容物不流動），然后觀察凝固塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如24h后不溶解即為陰性。
草酸鉀人血漿配制：草酸鉀0.01g放人滅菌小試管中，再加人5ml血，混勻，經離心沉淀，吸取上清液即為草酸鉀人血漿。
5.6桿菌肚敏感試驗挑取乙型溶血性鏈球菌液，涂布子血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有。．04單位的桿菌膚紙片，放于上述平板上，于36℃ 士1℃ 培養(yǎng)18h—24h，如有抑菌帶出現即為陽性，同時用已知陽性菌株作為對照。