LaVision 光片照明顯微鏡應(yīng)用于炎癥性腸道疾病研究
LaVision BioTec Light-Sheet Microscopy光片照明顯微鏡
文獻(xiàn)簡(jiǎn)述——Three-Dimensional Cross-Sectional Light-Sheet Microscopy Imaging of the Inflamed Mouse Gut
前言：
目前，一些炎癥性腸道疾�。↖BD），如克羅恩�。–D）或潰瘍性結(jié)腸炎（UC）等，其發(fā)病的確切機(jī)理仍然不清楚。然而，對(duì)于上述疾病的治療，近期已經(jīng)有更多的治療方案可供選擇，并且一些新發(fā)現(xiàn)的化合物可能進(jìn)一步改善IBD的治療方法。需要引起重視的是，如果沒有轉(zhuǎn)化研究，包括對(duì)小鼠模型的臨床前研究，這些新化合物的藥物開發(fā)是不可能的。在這類轉(zhuǎn)化研究中，病變組織的成像對(duì)于識(shí)別潛在靶點(diǎn)至關(guān)重要。然而，各種傳統(tǒng)成像技術(shù)的主要局限是樣本成像穿透深度有限、視野小、分辨率低，這樣會(huì)導(dǎo)致結(jié)果評(píng)價(jià)只選擇了很小一部分腸道組織，從而導(dǎo)致一些潛在結(jié)果誤判。光片熒光顯微鏡可以的克服這些缺點(diǎn)，已經(jīng)成為了胃腸道疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中的有力工具。
本研究使用了人源化小鼠模型，將CellTrace Yellow染色的人T細(xì)胞與AF647標(biāo)記的鼠CD31抗體一起注射到大腸炎免疫缺陷小鼠回結(jié)腸動(dòng)脈中。3小時(shí)后，處死小鼠，依次用含5mM EDTA的PBS灌注和含4% PFA的PBS灌注。腸管標(biāo)本嵌入1%瓊脂糖，后置入4% PFA。按照標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行透明化處理。
所有3D成像均由LaVision光片照明顯微鏡配合軟件Imaris完成。
LaVision光片顯微鏡的詳細(xì)介紹：http://qd-china.com/products2.aspx?id=434
結(jié)果圖像示例：
結(jié)果一，圖片詳細(xì)展示了LSFM對(duì)未經(jīng)組織切片的小鼠內(nèi)臟進(jìn)行橫切面掃描成像并可以任何角度和平面進(jìn)行觀察與分析，也可以生成視頻。
結(jié)果一，圖片詳細(xì)展示了LSFM對(duì)未經(jīng)組織切片的小鼠內(nèi)臟進(jìn)行橫切面掃描成像并可以任何角度和平面進(jìn)行觀察與分析，也可以生成視頻。
圖1所示。(A) LSFM獲取的3d重建圖像數(shù)據(jù)。人IBD T細(xì)胞呈綠色，鼠血管呈紅色，組織自發(fā)熒光呈灰色。(B) 混合（Blend）和最大強(qiáng)度投射(MIP)分別突出顯示了血管和轉(zhuǎn)移的細(xì)胞。(C) 高倍鏡下的回腸絨毛血管(紅色)和原發(fā)性IBD T細(xì)胞(綠色)。(D)LSFM的激光光片形成及光路圖。由LaVision Biotec提供。(E) 基于體積的細(xì)胞定量。
圖2所示。人源化小鼠T細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至炎癥腸道的歸巢模型分析。將源自UC患者的CD4+ T細(xì)胞按文中所示方法處理并注射至結(jié)腸炎免疫缺陷小鼠。在3個(gè)隨機(jī)位置上對(duì)歸巢細(xì)胞進(jìn)行定量。
文中的圖像信息確切地表明，作為一種全新的橫截面3D成像技術(shù)，LSFM在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中具有重要價(jià)值。通過本文證明了它可以用于分析炎癥人源化小鼠模型中IBD T細(xì)胞轉(zhuǎn)移。然而，除了這個(gè)應(yīng)用方向，還有其他IBD相關(guān)或各種胃腸病學(xué)研究模型和問題可以使用這一技術(shù)來進(jìn)一步拓展，可以更快、更好地獲取和展示光學(xué)信息。LSFM還可以擴(kuò)展應(yīng)用到所有關(guān)于血管生成、腫瘤擴(kuò)散或浸潤(rùn)、細(xì)胞追蹤和炎癥的問題。LSFM尤其適用于表達(dá)熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因鼠。此外，LSFM很可能適用于活檢或手術(shù)中獲得的人體組織標(biāo)本以進(jìn)行IBD或癌癥免疫治療等領(lǐng)域的研究和診斷。綜上所述，LSFM的相關(guān)研究有潛力為轉(zhuǎn)化研究和患者護(hù)理方面的重大進(jìn)展奠定基礎(chǔ)，促進(jìn)現(xiàn)在以及未來的治療方法的發(fā)展。
文中的圖像信息確切地表明，作為一種全新的橫截面3D成像技術(shù)，LSFM在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中具有重要價(jià)值。通過本文證明了它可以用于分析炎癥人源化小鼠模型中IBD T細(xì)胞轉(zhuǎn)移。然而，除了這個(gè)應(yīng)用方向，還有其他IBD相關(guān)或各種胃腸病學(xué)研究模型和問題可以使用這一技術(shù)來進(jìn)一步拓展，可以更快、更好地獲取和展示光學(xué)信息。LSFM還可以擴(kuò)展應(yīng)用到所有關(guān)于血管生成、腫瘤擴(kuò)散或浸潤(rùn)、細(xì)胞追蹤和炎癥的問題。LSFM尤其適用于表達(dá)熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因鼠。此外，LSFM很可能適用于活檢或手術(shù)中獲得的人體組織標(biāo)本以進(jìn)行IBD或癌癥免疫治療等領(lǐng)域的研究和診斷。綜上所述，LSFM的相關(guān)研究有潛力為轉(zhuǎn)化研究和患者護(hù)理方面的重大進(jìn)展奠定基礎(chǔ)，促進(jìn)現(xiàn)在以及未來的治療方法的發(fā)展。
文章視頻信息截圖
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www.gastrojournal.org
http://dx.doi.org/10.1053/j.gastro.2017.07.022
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標(biāo)簽：
顯微鏡、光片照明、LaVision、炎癥性腸道疾病
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