植物脯氨酸檢測試劑盒

 

組分貨號	名稱	規(guī)格	貯存
PP5040-01	試劑1-Pro裂解液	100 ml	RT
PP5040-02	試劑2-Pro標(biāo)準(zhǔn)液	1 ml	4℃
PP5040-03	試劑3-Pro顯色液	50 ml	RT 避光

● 產(chǎn)品簡介：

脯氨酸(Proline，Pro)是一種環(huán)狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電點為6.30，易溶于水。在正常環(huán)境情況下脯氨酸含量較低，但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，脯氨酸常有明顯積累，即積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發(fā)生反應(yīng)，能產(chǎn)生穩(wěn)定的紅色產(chǎn)物，以分光光度計測定處吸光度，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。

該試劑盒不使用傳統(tǒng)的磺基水楊酸和甲苯等有害溶劑，經(jīng)濟環(huán)保。

該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量，不適用于動物及醫(yī)療樣品中脯氨酸的測定。

按照一次使用1 ml Pro顯色液計算，試劑盒可以使用50次。

● 自備材料：

植物根莖、葉子等；剪刀；螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板；1ml玻璃比色皿；分光光度計或酶標(biāo)儀；水浴鍋或干浴器；離心機

● 操作步驟：

1、 樣本處理：

取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，剪碎，迅速稱取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液（建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管），沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻)，10000rpm離心 2分鐘，上清即為脯氨酸提取液，4℃保存?zhèn)溆谩４郎y提取液如不能及時測定，應(yīng)置于-20℃保存，1-2天內(nèi)穩(wěn)定。

2、 Pro顯色液的配制：

把小管裝的茚三酮粉末，全部加入到茚三酮溶解液中，劇烈混勻至完全溶解，即配成Pro顯色液。注意：Pro顯色液具有一定腐蝕性，請小心操作。

3、 配制系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：

取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到裝有Pro標(biāo)準(zhǔn)液的小管中，混勻后徹底溶解，即配成的Pro標(biāo)準(zhǔn)液（100mg/ml）。

取1 μl 100mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)液加入到1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液待用。參照下表配制1-6號不同濃度的Pro標(biāo)準(zhǔn)溶液。

編號	1	2	3	4	5	6	7	8
100μg/ml Pro標(biāo)準(zhǔn)液加入量（ml）	0.01	0.02	0.04	0.06	0.08	0.10	0.15	0.2
Pro裂解液（ml）	0.49	0.48	0.46	0.44	0.42	0.4	0.35	0.3
脯氨酸含量（μg）	1	2	4	6	8	10	15	20

4、 樣品測定:

= 1 \* GB3 ① 分光光度計測定：參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液，依次加入試劑：

	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管	測定管
試劑1-Pro裂解液	0.5 ml	-	-
步驟1中的脯氨酸提取液	-	-	0.5 ml
Pro標(biāo)準(zhǔn)液（步驟3中1-8管）	-	0.5 ml	-
試劑3-Pro顯色液	1 ml	1 ml	1 ml

= 2 \* GB3 ② 酶標(biāo)儀測定：參考下表設(shè)置反應(yīng)混合液，依次加入試劑：

	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管	測定管
試劑1-Pro裂解液	50 μl	-	-
步驟1中的脯氨酸提取液	-	-	50 μl
Pro標(biāo)準(zhǔn)液（步驟3中1-8管）	-	50 μl	-
試劑3-Pro顯色液	100 μl	100 μl	100 μl

④ 冰浴或流水冷卻至室溫，10000 rpm離心 2分鐘，如發(fā)現(xiàn)沒有不溶物，也可以不離心。 

⑤ 取上清，用空白管作為對照，用分光光度計或酶標(biāo)儀檢測分別測定反應(yīng)混合液520nm吸光度值。 

5、 計算：

以系列脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)(1-6號管)含量(μg)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測定管的吸光度進而計算其脯氨酸含量。

植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=（C×V_T）/(W×V_S)

C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的脯氨酸含量(μg)

V_T=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)

W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)

V_S=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)