打怪升級(jí)的不敗經(jīng)驗(yàn)在于“儲(chǔ)備”,儲(chǔ)備技能和能量,從容應(yīng)對(duì)每一個(gè)遇到的挑戰(zhàn)。
就像解決熒光定量PCR儀常規(guī)問題一樣,學(xué)幾招,也許在某一刻就是你需要的,先儲(chǔ)備起來吧!
Q :7500快速定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應(yīng)管或者96孔板嗎?
A:不可以,7500 快速定量PCR儀只支持0.1ml PCR反應(yīng)管或者96孔板
Q :如何監(jiān)控反應(yīng)體系是否有蒸發(fā)?
A:查看Rox信號(hào)是否在整個(gè)PCR過程中保持一致。在多組分圖譜界面,選擇單孔,如果Rox信號(hào)逐漸增高,代表樣品孔中有蒸發(fā)。如下圖所示:
Q :內(nèi)參基因與目標(biāo)基因是否需要在相同的反應(yīng)板上運(yùn)行相對(duì)定量?
A:是,內(nèi)參基因必須和目標(biāo)基因在相同的反應(yīng)板上。軟件可以根據(jù)在相同反應(yīng)板上的內(nèi)參基因和目標(biāo)基因自動(dòng)進(jìn)行相對(duì)定量計(jì)算,并計(jì)算估值區(qū)間。
Q :定量PCR系統(tǒng)支持的熒光染料有哪些?
A:下面是實(shí)時(shí)定量PCR儀器能夠檢測(cè)染料的表:
DYE |
7300 |
7500 |
7900 |
Cy3™ |
X |
||
Cy5™ |
X |
||
FAM™ |
X |
X |
X |
JOE™ |
X |
X |
X |
NED™ |
X |
X |
X |
ROX™ |
X |
X |
X |
SYBR® Green I |
X |
X |
X |
TAMRA™ |
X |
X |
X |
Texas Red® |
X |
||
TET™ |
X | ||
VIC® |
X |
X |
X |
Q :用戶是否可以添加自定義染料?
A:可以,可以添加自定義染料,但染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)必須與儀器的濾光片設(shè)置兼容。
Q :常用熒光染料的發(fā)射波長(zhǎng)為多少?
A:
染料名稱 |
發(fā)射波長(zhǎng)(nm) |
FAM™ |
~ 520 |
SYBR® Green I |
~ 520 |
TET™ |
~ 540 |
JOE™ |
~ 550 |
VIC® |
~ 550 |
NED™ |
~ 580 |
CY3™ |
~ 580 |
TAMRA™ |
~ 580 |
ROX™ |
~ 610 |
Texas Red® |
~ 610 |
CY5™ |
~ 670 |
Q :ABI各種型號(hào)的定量PCR儀有什么特點(diǎn)?
A:
◆ 7300、7500、7500 快速系統(tǒng)是用鹵鎢燈作為激發(fā)光源,并利用濾光片檢測(cè)激發(fā)熒光
◆ 7300是一個(gè)激發(fā)光和四色濾光片
◆ 7500和7500快速有五個(gè)激發(fā)光和五個(gè)濾光片,所以可以檢測(cè)遠(yuǎn)紅外。
◆ 7900HT系統(tǒng)是用氬離子激光作為激發(fā)光源,可以掃描500nm -650nm所有波長(zhǎng)的熒光
◆ 7900HT系統(tǒng)可以提供更高通量,如 384孔板和低密度芯片升級(jí),以及自動(dòng)手臂來裝載反應(yīng)板設(shè)備
Q :BHQ作為探針的淬滅基團(tuán),在ABI定量PCR系統(tǒng)如何設(shè)定?
A:淬滅基團(tuán)設(shè)為none。
Q :7300/7500/7900HT定量PCR系統(tǒng)軟件生成的文件有哪些?
A:針對(duì)7300 v1.4及以下版本軟件,7500 v1.4 及以下版本軟件,7900HT軟件生成的文件,包含擴(kuò)增曲線的為數(shù)據(jù)文件,以 sds為文件后綴。相對(duì)定量分析產(chǎn)生以sdm為后綴文件,設(shè)置模板以 sdt為后綴。
針對(duì)7500 v2.0版本軟件,包含擴(kuò)增曲線的為數(shù)據(jù)文件,以 eds為文件后綴。相對(duì)定量分析產(chǎn)生以edm為后綴文件,設(shè)置模板以 edt為后綴。