阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒（一管式PCR-熒光探針法）

◆ 產(chǎn)品說明

 阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）參照《SN/T 1870—2016 進出口食品中食源性致病菌檢測方法 實時熒光PCR法》進行設(shè)計，可針對食品樣品中阪崎克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）的特異核酸片段進行擴增，通過實時擴增曲線判定結(jié)果。該產(chǎn)品檢出限為10^3 cfu/ml（使用071021M細菌基因組DNA提取試劑盒提取1 ml 10^3cfu/ml增菌液的細菌基因組DNA作為模板）。

◆ 產(chǎn)品組成（ 96測試）

◆ 適用儀器

   熒光PCR儀（如ABI 7500）等可配套0.1 mlPCR八聯(lián)管的PCR擴增儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；⑤離心機；⑥渦旋混勻器；⑦金屬��；⑧均質(zhì)機、攪拌機或研缽等研磨器具；⑨電子天平。

◆ 注意事項

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。

   1）第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

   2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

   3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。

   ★ 分區(qū)之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，實驗產(chǎn)生的所有廢棄物及時處理。

3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前剪下所需的測試數(shù)，解凍后使用前離心30秒。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照《GB 4789.40-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗》進行阪崎克羅諾桿菌的樣品制備、增菌培養(yǎng)和分離。

◆ 實驗操作

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用試劑配套細菌組DNA提取系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2．添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒中進行）

剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，使用穿刺加樣法穿過固封層向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-ES-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進行PCR擴增反應(yīng)。

3. 擴增反應(yīng)（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量PCR儀，熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴增反應(yīng)：

4.基線和閾值設(shè)定

  基線調(diào)整取3-15個循環(huán)的熒光信號，閾值線應(yīng)超過陰性對照擴增曲線的最高點。

◆ 結(jié)果判定

檢測樣品無Ct≥40，可報告樣品陰性，不含有阪崎腸桿菌或含量低于檢測限；

檢測樣品Ct ≤35，曲線呈“S”型擴增曲線，可直接報告樣品陽性，含有阪崎腸桿菌。

檢測樣品35＜Ct＜40，建議重復(fù)實驗。重復(fù)結(jié)果Ct≥40則樣品為陰性，否則為陽性。

• NG反應(yīng)為平滑直線，PG反應(yīng)為“S”型擴增曲線且Ct值＜30，此次檢測結(jié)果有效，否則無效。如重復(fù)檢測結(jié)果仍為無效，請與技術(shù)支持人員聯(lián)系。

◆ 企業(yè)信息

上海一基實業(yè)有限公司    

電話：021-61119791