細胞作為我們生命最小的單位,我們有宏觀的溝通,他們自然也有微觀的溝通。而這細胞的“語言”,就是外泌體系統(tǒng)。
外泌體系統(tǒng)的意義
簡單的來說,細胞通過分離自己的一部分膜,把自己“情話”(核酸,蛋白等)包裹成外泌體釋放出去,最后融入到別的細胞里進行溝通。對于我們?nèi)祟悂碚f,破解了外泌體系統(tǒng)等于破解了細胞溝通的密碼,對于我們生命科學(xué)發(fā)展意義非凡。
用超速離心法純化外泌體
研究外泌體的第一步,那一定是得先把這些小家伙給抓住。雖外泌體分離市場上百花齊放。 但這些分離技術(shù)都在純度上不盡人意。得到最純的外泌體,揭開他們背后的故事,超速離心技術(shù)是最好的選擇。
那么,
如何選擇合適的離心機
進行外泌體離心分離?
賽默飛世爾是科學(xué)服務(wù)領(lǐng)域的世界領(lǐng)導(dǎo)者,旗下離心機產(chǎn)品一直以安全可靠與無微不至的便捷性著稱。
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卓越的離心性能:最大離心力達802,000 xg,滿足外泌體純化實驗需要
多樣的轉(zhuǎn)頭選擇可離心從1.5 mL離心管到250 mL離心瓶的各式離心容器,滿足您實驗室離心各種應(yīng)用的需要,盡顯無以倫比的便捷性。
·Auto-Lock轉(zhuǎn)頭自鎖,3秒即可更換轉(zhuǎn)頭實現(xiàn)一機多用;Auto-ID瞬時轉(zhuǎn)頭自動識別
·第三方認證Clickseal生物安全性密封技術(shù),防止氣溶膠產(chǎn)生,保護實驗人員的安全
·永不疲勞的Fiberlite轉(zhuǎn)頭,重量輕,硬度大,耐腐蝕,提供15年質(zhì)保,終身無需減速使用
近日,麻省綜合醫(yī)院(MGH)的研究人員開發(fā)的一款新型微流體裝置。 該裝置可以利用微流控技術(shù)快速檢測血液中癌癥細胞來源的外泌體,以此作為癌癥診斷手段。
通訊作者Shannon Stott教授說,他們的設(shè)備能夠從在血液中數(shù)十億細胞外囊泡中挑選出腫瘤特異的細胞外囊泡。這將為未來癌癥診斷及監(jiān)控提供新的方法。[1]
由此看來,外泌體的應(yīng)用可謂是越來越廣泛了。這一技術(shù)也符合了當(dāng)今精準(zhǔn)醫(yī)療的熱點“液體活檢”思想, 應(yīng)用前景可謂十分的光明。關(guān)于液體活檢,它另一個簡單粗暴的名字叫“滴血驗癌”。想了解“液體活檢”的看官可以繼續(xù)關(guān)注我們的微信公眾號。我們往后會有詳細敘述。
那么,超速離心技術(shù)在外泌體研究中到底是如何運用的呢?
用超速離心法純化外泌體
參考實驗流程
1.首先取細胞培養(yǎng)液上清或體液作為樣本,低速離心300 xg,10 min,分離出細胞;留上清 2000 x g離心,10 min,去除死細胞。
2.剩下上清繼續(xù)提高離心力到10000 xg,30 min,去除細胞碎片,處理好后的上清可準(zhǔn)備進行超速離心步驟。以100,000 xg的離心力,離心70 min,得到粗制外泌體沉淀(含有少量雜蛋白)。
3.用PBS重懸外泌體沉淀,再次100,000 xg,離心70 min,即可得到純凈的外泌體。[2]
如何選擇合適的離心機進行外泌體離心分離?
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推薦配置方案:
*此方案僅供參考,并未涵蓋所有轉(zhuǎn)頭、吊籃、適配器及離心管。 如有需要詳細配置方案,請聯(lián)系當(dāng)?shù)劁N售。
文章來源:
[1] Engineered nanointerfaces for microfluidic isolation and molecular profiling of tumor-specific extracellular vesicles. Nat. Commun. 2018,9(1):175.
[2] Théry, Clotilde, et al. “Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids.” Current Protocols in Cell Biology, 2006, doi:10.1002/0471143030.cb0322s30.